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流式细胞术在组织化学与免疫组织化学中的应用 流式细胞术(flow cytometry，FCM)是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。该技术是一项集激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学、免疫荧光细胞化学技术及单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。概括地说，流式细胞技术是通过流式细胞仪(flowcytometer)对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速 ...

激光扫描共聚焦显微镜在组织化学和免疫组织化学中的应用 激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confcal microscopeLSCM)是激光、电子摄像和计算机图像处理等现代高科技手段相互渗透的产物。由于其高分辨率，高灵敏度及高放大率等特点，在细胞水平上能作多种功能测量和分析，如荧光定量测量、共聚焦图像分析、三维图像重建、活细胞动力学参数监测和细胞间通讯研究等，成为生物医学 ...

光学切片 激光共聚焦成像的特性使其不仅能获得胜过普通显微镜的分辨率，同时具有深度识别能力和纵向分辨率，从而可以清晰地观察较厚的标本，并可以掌握其细节。以一个最小步距0.1um的微动步进马达控制载物台升降，使聚焦平面依次位于组织标本的不同层面，可以逐层获得标本相应的光学横断面图像。这一过程称为“光学切片”，这种功能称为“显微CT”。如图所示，用激光扫描共聚焦显微镜对经过荧光染色的神经元从细胞 ...

运用流式细胞仪计数细胞应注意的问题 制作组织匀浆或细胞悬液，用荧光染料染色，则可以用流式细胞仪计数不同DNA含量或倍数的细胞数。例如，在睾丸组织中，精子细胞为单倍体细胞，精原细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞和其他非生精细胞为双倍体细胞，初级精母细胞以及处于分裂期的精原细胞和非生精细胞为四倍体细胞。因此，运用流式细胞仪测定睾丸组织各级生精细胞DNA倍体的变化，可以间接判断不同生精细 ...

流式细胞术数据处理与分析 数据的显示通常可分为一维单参数直方图(histogram plot)、二维点图(dot plot)、二维等高图(contour)和假三维图(pseudo 3D)等。下面简述最常用的单参数直方图和二维点图。 1．单参数直方图 单参数直方图是一维数据用得最多的图形，可用来进行定性分析和定量分析。横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，其单位用“道数”(c ...

荧光标记物的定位分析 激光扫描共聚焦显微镜可进行重复性极佳的活细胞或固定细胞的荧光定量分析。利用这一功能可对单个细胞或细胞群的溶酶体、线粒体、DNA、RNA和受体分子含量、成分及分布进行定性和定量测定。 激光扫描共聚焦显微镜可以自动将荧光图像与相差图像重叠，以显示荧光标记物在形态结构上的精确定位。在同一细胞或组织标本上需同时检查两种或两种以上抗原时要进行双(多)重荧光染色。可 ...

三维图像重建 对具有三维空间立体结构的组织细胞进行研究时，尤其是定量研究其结构形态时，往往需要显示空间构造上的三维数据，经计算机图像处理及三维重建软件将得到各光学切片的数据组合，形成一个真实的三维图像，并可从任意角度观察，也可以借助改变照明角度来突出特征性结构，产生更生动逼真的三维效果。一系列模拟荧光处理图像可被储存并以三维动画形式显示，这可谓是形态学研究方法的重大突破。激光共聚焦显微镜三 ...

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的注意事项《一》制备高特异性和高效价的荧光抗体 标本只有在用荧光探针标记的前提下才能进行共聚焦显微镜检测．制备高特异性和高效价的荧光抗体是检测的关键。这就要求选用高质量的荧光素和高特异性与高效价的免疫血清。同时还要对荧光抗体进行质量鉴定，主要是进行特异性和敏感性鉴定。《二》标本制作要求 1．标本厚度 组织切片或其他标本不能太厚，否则激发光多数消耗在 ...

体视学的基本概念 对各种生物结构的形态学研究是医学各领域研究的重要方面，尤其是定量形态学研究。对器官的整体结构水平形态学研究相对比较容易，比如用排水法测量肝脏的体积则可以清楚地了解正常肝脏与患有肝硬化病人肝脏的体积差别。但是随着科学的发展，研究者越来越关心人体在微观结构上的形态特征。任何组织结构，如细胞、细胞间质、细胞器以及某种染色阳性结构等，均为具有一定形状和空间分布的几何物体。结构的形 ...

荧光定量图像分析 激光扫描共聚焦显微镜不仅可以对生物样本进行二维和三维图像分析，还可以与荧光探针相结合，在图像处理的同时，进行图像定量分析。例如细胞面积及周长的测定和细胞核面积的测定，从而可以将生物体的形态学特征进行量化，提高了研究结果的准确性。激光扫描共聚焦显微镜能对单标记或双标记生物样品的共聚焦荧光定量分析，并显示荧光沿Z轴的强度变化。根据实验要求设置好仪器测试的各种参数后，计算机便能 ...

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的优势 激光扫描共聚焦显微镜与图像半定量分析相比，具有以下优点： 1．更精细、精确度更高。激光扫描共聚焦显微镜对免疫荧光组织化学染色样品做定量分析时，利用激光聚焦和系统软件分析对组织进行深层扫描，不破坏组织细胞结构，可深层次准确定位并精确定量。而一般图像分析只是以荧光灰度的差别变化进行半定量分析。 2．激光扫描共聚焦显微镜一般有两个以上不同波长的 ...

定量免疫荧光测定 激光扫描共聚焦显微镜可以对经过荧光标记的组织标本共聚焦荧光进行定量分析．并显示荧光沿Z轴的强度变化。它除了可以对单、双或三重标记的细胞及组织标本的荧光进行定量、定位分析外，还可以借助显微CT功能在不损失分辨率的前提下对标本深层进行荧光分布的测量．获得组织形态结构信息。激光扫描共聚焦显微镜同样适用于高灵敏度的快速免疫荧光测定，从而准确检测抗原表达、荧光原位杂交斑点及组织细胞 ...

三维图像与三维结构之间的关系 从下面的示意图中可以看到。当一个处于三维空间内的立体结构出现在二维切面上时，特征物的体积则表现为面积；特征物的表面积则表现为边界线(轮廓)；线性结构无论在三维空间内如何走行。在二维切面上仅表现为断面数(点)。因此，经严格设计的体视学抽样方法，通过对特征物在二维切片的面积测量，便能获得它在三维空间内的体积；通过对其边界线长度的测量，便能获得表面积；通过对断面数的 ...

体视学几何探针 在明确二维参数与三维参数之间的关系之后，欲得到三维数据首先要准确有效地获取二维参数。在体视学中这些问题非常容易解决，只要利用适合的几何探针(geometric probes)和恰当的计数方法便可以得到。体视学的测试探针包括零维的测试点(test point)、一维的测试线(testline)、二维的测试框(testframe)、三维的体视框(disector)。几何探针a. ...

大脑研究抽样过程 随机选择一侧大脑半球，将其包埋于6％琼脂中，切取等距离脑组织切片，切片厚度为7mm，共切取20张切片。我们确定从一侧大脑半球抽取5块大脑白质进行研究，首先，将从20张脑组织切片中抽取5片，即每4张等距切片中抽取一张(每隔3张抽取一张)。从前4个数字当中随机选择一个，这个数字则作为第一张脑片的抽取位置，假设选择3，则第3张脑片作为第一个脑组织块抽取的位置，然后每隔3张脑片抽 ...

三维空间内随机抽样 我们不难发现对于所进行观察的切片，体视学有着自身的规定。同时，从统计学角度出发，不可能只在一张切片上观察计算便得到关于整个特征物的准确三维定量信息，故体视学必然存在其特有的抽样原则，而这些原则必须有效而且切实可行。体视学可称为形态结构的统计学，体视学测试过程，实际上是抽样过程。下面介绍体视学对切片的要求和如何进行标本抽样。 在体视学中经常用到“无偏(unbiaas ...

三维空间内务向同性的概念及各向同性切片的制作 为正确地得到特征物在三维空间内长度和表面积等，必需对其做方向性随机抽样。如果特征物在三维空间内各个方向均匀分布，即具有各向同性，如肾小体的毛细血管球，可通过组织作任意方向切片，然后在切片上进行二维研究，通过所得二维数据推断特征物的三维结构信息。如果特征物在三维空间内呈各向不同性分布，则需通过组织制作各向同性切片，并在其中获取数据。制作各向同性切 ...

抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulinIg)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为 IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda ）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma） ...

据《自然》网站11月25日报道，美国生物学家研究出一种基因线路，可以按照需要编制程序，指示细胞对想要的信号作出响应。这项技术有着广泛用途，比如诱导干细胞分化成体内的不同组织，或在营养不良时激活植物的防御机制等。相关研究发表在11月26日出版的《科学》杂志上。

生物技术常用实验操作简单介绍