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弹性蛋白的溶解性极差，一般采取的技术路线是使用多种手段将非弹性蛋白去除，以获得不溶性的弹性蛋白。操作方法：细胞实验技术论坛http://bbs.bbioo.com/forum-138-1.html1． 将富含弹性蛋白的组织（如器官、胸膜、主动脉等）上附着的结缔组织仔细去除。2． 用打碎机将组织在4℃、50%吡啶水溶液中打碎，3000g×10min离心，弃上清，取沉淀。3． 沉淀用冷蒸馏水离 ...

胶原蛋白是细胞外间质的主要成分，占人体总蛋白的1/3胶原蛋白具有广泛的生物活性，参与细胞增殖、运动、分化、以及肿瘤细胞的转移等病理过程。胶原提取物可作为某些特殊细胞培养的基质，模拟细胞的体内环境。胶原可以作为整形及美容的填充物材料，也可用于人造血管的预凝，在许多疾病的诊断与研究（肝硬化、肺纤维化、硬皮病等）中，胶原的提取及分析已成为必要的手段。 目前已发现的胶原类型有13种，结构与功能较清楚 ...

线立体是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线立体内进行的氧化所产生的能量来供给，建立线立体的关键要保持其完整性及纯度。分离的原则可用分级离心方法，低速去除细胞核及细胞碎片后，再用高速梯度离心分离线立体。 操作方法：细胞实验技术论坛http://bbs.bbioo.com/forum-138-1.html所有操作需在4℃下进行。1． 将饥饿一天的300g雄性大鼠处死迅速取出 ...

溶酶体是处理细胞吞噬物的细胞器，含有高浓度的各种水解酶类，用于细胞内的消化过程。它被一层单位膜单独包围，含有12种以上的酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶。它们都是消化酶，能分解细胞内的物质，如蛋白质、核酸、多糖类。这种消化酶与细胞内含物的其它部分严格的分开，否则它们将进行自身消化，因此又有“自杀袋”自称。现在认为溶酶体与卵的受精、形态发生、衰老及某些疾病有关，其分离纯化方法可用分级离心，再用 ...

微粒体是一种脂蛋白所包围的囊泡，含核糖核酸、蛋白质和脂类。蛋白质中包括多种与糖类、脂类和蛋白质代谢有关的酶。通过甲基化或氢化作用，使药物修饰而解毒的酶也在微粒体内将。RNA存在于微粒体的小颗粒即核蛋白体中，分离微粒体的方法是利用分级离心方法，去掉细胞核、线立体后，经超速离心法而制备。操作方法：细胞实验技术论坛http://bbs.bbioo.com/forum-138-1.html1．将体重约为 ...

细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成，细胞质中含有若干细胞器和细胞骨架等，这些也称为亚细胞组分。对于细胞的结构及功能的研究，是细胞生物学的基本课题，其重要的研究手段之一是分离纯的亚细胞组分 。这种拆离的方法，使细胞中各种生物学过程彼此分开，互不干扰，便于确定一种复杂过程中的细节，从而深化我们对细胞整体功能的认识。用这种方法已经阐明了细胞中的许多重要反应，例如蛋白质的合成机制，最初发现细胞质粗提液使R ...

在化学致癌致突变的实验研究中，除少数化学物质，如烷化剂、亚硝基酰胺、碱基类似物石棉等不需活化外，大部分化学物质均需经代谢活化或其代谢活化产物才能引起靶细胞的致癌致突变作用。通常用的活化系统为大鼠肝微粒体酶（简称S-9），这是一种复合酶系，广泛地分布在各种哺乳动物细胞的微粒体和核膜上，其主要成分有三种类型，即NADPH-细胞色素P-450还原酶、磷酸胆碱和血红素蛋白以及细胞色素P-450。它们的作用 ...

哺乳动物细胞和人体细胞的同步化以及相应的染色体分离方法，其中期染色体的形态与生物学活性良好，而且可以长期保存。这对于研究染色体超微结构和染色体化学性质很有意义。通过分离的染色体介导的基因转移到受体细胞，借以研究哺乳动物和人体染色体的基因定位、基因调控等均是目前体细胞遗传学中十分活跃的领域之一。显而易见，大量高纯度的中期染色体的纯化尤为重要。操作方法：细胞实验技术论坛http://bbs.bbio ...

染色质是细胞间期以散在形式存在的DNA、蛋白质和RNA相结合的复合物，其结构十分复杂，尤其是真核细胞的基因组，无论在数量上还是重复序列上都比原核细胞复杂。具有生命过程中的重要生理功能，如DNA的转录、均与染色质的结构和功能有关，在染色质上由于组蛋白的存在，其转录活性受到限制，只有转录活性的一部分，如去除组蛋白，其转录活性增高，染色质非组蛋白含有激活和抑制DNA转录的组分，对基因表达调控有重要作用。 ...

线立体DNA是染色体遗传物质，哺乳类动物的线立体DNA为共价闭合环的环状DNA。它变异快、结构相对简单，经母系遗传，对真核生物基因组的结构、复制、转录、调控机理等方面都起着重要作用。近年来被广泛用于近缘种间或种内种群间亲缘关系的研究。线立体DNA最早是用氯化铯梯度离心方法获得，该法提取的线立体DNA纯度高，但所需仪器设备昂贵，实验周期长，限制其在群体遗传研究中的应用。继而出现了酚抽提加酶解、碱裂 ...

一、细胞培养的历史沿革细胞培养（cell culture）的历史可以追溯到1885年Willhelm Roux尝试利用盐水培养鸡胚组织并让其存活数天的记录。1907年，一位美国的动物学家Ross Granvlle Harrison利用悬滴法（hanging drop technique）将分离自青蛙胚胎的神经细胞种植在青蛙的淋巴液（frog lymph）中，并在培养数小时之后观察到轴突的生长，首次 ...

一、体外培养细胞的分型体外培养细胞时，主要有两种培养体系：一种是贴附依赖型，一种是悬浮型。贴附依赖型大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖型细胞，依据培养细胞在体外的形态大致可将其分为以下四种类型：上皮细胞型细胞多呈扁平不规则多角形，中央有圆形细胞核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。此型细胞多起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮 ...

原代代培养物经第一次传代培养后的细胞，常被称为细胞系（cell line）。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系有一定差异的细胞系，常被称为该细胞系的亚系（subline）。从一个经过鉴定的细胞系采用选择法或单细胞克隆进一步所得到的细胞群，常被称细胞株（cell strain）。由原细胞株进一步分离培养出的与原株性状不同的细胞群，又被称为亚株（substrain）。一、细胞建系的一般程序细胞 ...

一、培养细胞的常规观察培养细胞在体外的生长过程是一个动态的连续过程，细胞的数目、形态以及培养基的颜色、澄明度等在一定程度上都是细胞生长状况的表现。借助于肉眼或显微镜的帮助，通过对上述常规指标的观察，可以有效地帮助我们及时把握细胞的生长信息，适时、适当采取相关措施培养好细胞。（一）培养基的观察培养基的颜色和澄明度是肉眼观察的两个重要指标。新鲜的培养基一般呈现桃红色，pH值约为7.2-7.4，培养过细 ...

衰老又称老化，通常指生物发育成熟后，在正常情况下，随着年龄的增加，其机能减退、内环境稳定性下降、结构中心组分发生退行性变化而趋向死亡的不可逆现象。一、细胞的寿命机体的细胞不断衰老与死亡，同时又不断地有细胞增殖与新生，呈动态平衡。对多细胞生物而言，细胞的寿命、衰老、死亡与机体的寿命、衰老和死亡是不同的概念。机体内个别细胞，甚至是某些器官组织中的许多细胞衰老与死亡，只要不发生在重要器官或组织，并不影响 ...

关于衰老机制的假说很多，而这些学说间又相互重叠、相互补充，甚至有些学说非常相似，例如有一种“DNA修复说”就与“体细胞DNA突变说”大同小异，只不过前者重点在于细胞防御体系而不在于损伤本身。再有“蛋白错误假说”与“体细胞DNA突变说”又相互重叠。由此，我们需用各种学说才能大致把握衰老机制的全貌。一、遗传决定说众所周知，在一定环境条件下，一个种内所有个体的寿命非常一致， 例如一个特殊品系大鼠的群体寿 ...

任何生命都有终结，细胞死亡（cell death）与细胞生长、分化、增殖一样，都是细胞生命活动的正常组成部分。引起细胞死亡的因素很多，但不外乎内因和外因两种。内因通常是指由于衰老所导致的自然死亡，而外因则指外界环境的各种因子超过了细胞所承受的强度及阈值，对细胞造成的损害。根据细胞死亡的模式不同，可分为坏死（necrosis）和凋亡（apoptosis）两种类型。一、细胞死亡概念的发展近二十年来，在 ...

一、死亡受体介导的细胞凋亡死亡受体属于肿瘤坏死因子基因家族，其共同特征是都有相似的、富含半胱氨酸的细胞外结构域。 死亡受体还有一个同源的、称为死亡结构域的胞内序列。死亡结构域一般使死亡受体与胞内凋亡机制相连，但它们有时也会介导与凋亡无关或抑制凋亡的过程。（一）FasL-Fas 系统介导的细胞凋亡自杀相关因子Fas（factor associated suicide）是广泛表达于正常细胞和肿瘤细胞膜 ...

生物体内的细胞增殖和凋亡在正常情况下处于动态平衡，如果细胞增殖过多或凋亡减少就会导致细胞过剩性疾病；如果增殖减少或凋亡增加，就会导致细胞减少性疾病。凋亡研究将为人类某些重大疾病的防治提供新策略。一、细胞凋亡减少和细胞存活增加的有关疾病这类疾病主要有癌症、自身免疫病、某些病毒病，以及结肠息肉等疾病。过去只重视细胞增殖所造成的疾病，自从细胞凋亡概念提出后，人们开始重视细胞凋亡与疾病的关系。（一）肿瘤过 ...

实验概要大肠杆菌感受态细胞的CaCl2法制备及质粒转化。实验原理处于对数生长期的细菌经CaCl2处理后接受外源DNA的能力显著增加。细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短 ...