染色质小分子多肽的提取

染色质是细胞间期以散在形式存在的DNA、蛋白质和RNA相结合的复合物，其结构十分复杂，尤其是真核细胞的基因组，无论在数量上还是重复序列上都比原核细胞复杂。具有生命过程中的重要生理功能，如DNA的转录、均与染色质的结构和功能有关，在染色质上由于组蛋白的存在，其转录活性受到限制，只有转录活性的一部分，如去除组蛋白，其转录活性增高，染色质非组蛋白含有激活和抑制DNA转录的组分，对基因表达调控有重要作用。具有调控基因表达的染色质多肽，以从小牛胸腺和大鼠肝DNA中提出。并发现肿瘤组织中的含量较正常细胞减少，这是否与肿瘤细胞以及癌变过程中染色质多肽具有抑制和激活DNA转录的活性升高有关。
    操作方法：
（一）制备细胞核：（
（二）提取染色质：
1．破细胞核：将纯核悬浮于4℃ 10mmol/L Tris-HCl pH7.6缓冲液中， 玻璃匀浆器
中匀浆，2h后于1,800g×15min，4℃，离心。弃上清，沉淀为粗染色质。
    2．去 核蛋白 ：沉淀悬浮于10ml冷的8mol/L脲素10.05mol/L PBS pH7.6溶液中，混匀，18,000g×15min，4℃，离心。弃上清，沉淀洗涤，离心后弃上清，保留沉淀。
    3．脱脲盐：沉淀加入20ml冷的6.5%乙醇溶液，于1,500g×15min，4℃，离心。弃上清，沉淀按类似方法洗涤5次，以去除脲盐。这样可得到纯的染色质。
  （三）多肽的梯度提取：
    1．CP4.5多肽的提取：将染色质悬浮于0.005mol/L NH ₄ Ac-HAc pH4.5 缓冲液 中，进行分次提取。每次提取时，用25ml NH ₄ Ac/HAch 缓冲液 ，在冰浴中用玻璃匀浆器匀浆5~6次，移入100ml锥形瓶中，在4℃冷室内电磁搅拌提取4h，1,500g×15min，4℃，离心。沉淀再提取，上清超虑，，收集含分子量<10,000的虑液进行UV扫描，重复5~6次，收集210nm吸收峰处虑液，并合并，冷冻真空干燥，得CP4.5样品。
   2．CP9.5多肽的提取：将离心后的沉淀物及保留在虑膜上的物质合并，再用0.2mol/L  NH ₄ Ac-HAc pH9.5缓冲液，按上述方法提取5~6次，得CP9.5。