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最近要写一篇关于RNAi的综述，昨天在nature上面找了一篇关于rnai全文的综述，觉得写的挺好，拿出来分享Nature(C) 2004 Nature Publishing Group----------------------------------------------Volume 431(7006) 16 September 2004 pp 338-342----------------------------------------------Revealing the world of RNA interferenceMello, Craig C.1 ...

1.原理和方法总则操作指南质粒的简单提取特殊类型质粒提取酵母质粒提取 基因疫苗质粒提取 双歧杆菌质粒提取 重组质粒的提取2.质粒的保存与运输质粒的保存低浓度质粒的保存滤纸上质粒的溶解3.试剂与试剂盒Promega的Wizard试剂盒Promega试剂盒效果谈4.经验之谈质粒提取的一点经验 提取失败请注意关于低拷贝质粒简便的质粒提取方法振荡的手法为什么会出现沉淀一篇关于质粒提取的好文章大提质粒经验谈5.质粒的酶切

RNA-isolation (TRIZOL method)Isolation of RNA from whole worms using TRIZOL reagent (Gibco-BRL).1) Wash worms from a 60 mm plate with 1 ml DEPC-treated water.2) Spin down worms at 4000xg in microfuge for 1 minute.3) Remove excess water and add 1 ml Trizol reagent. Vortex and invert tube. Let sit at room ter ...

shRNA 资源库及其构建方法shRNA资源库：以下资源库的构建及其详细的protocol都可以在网站下载1.NCBI　shRNA资源库http://cgap.nci.nih.gov/RNAiAbout RNAi on CGAPThe NCI is part of the consortium supporting the preparation of human and mouse libraries containing RNAi constructs that target cancer-relev ...

我现在正在做的是AFLP方面的东西，结果检测必须要做变性胶电泳才能看到，但是前一阵子我做的一直不顺，条带少，我试着减少引物的筛选个数和降低退火温度结果还是这样，一时不知道从何处找原因，想求教你的是1、先看看我前两天做的变性胶电泳图片，条带太少，我看到的文献都是说条带在50到100的样子，为什么我跑的是这样子的呢，我做了减少引物的筛选碱基的个数和降低退火温度，结果还是差不多，请问各位做过AFLP的或者是跑变性聚 ...

以下是我翻译的脂质体说明书，请多指教————————————————————————————InvitrogenLipofectamineTM 2000Cat. No. 11668-027 Size: 0.75 mlCat. No. 11668-019 Size: 1.5 ml含量及保存：LipofectamineTM 2000 为液态，浓度为1mg/ml。储存在4℃，注意不能冻存。重要原则：进行转染时应遵循下面的原则：1．对大多数细胞来说，DNA(ug)与脂质体(ul)混合的比例应为1:2至1:3。例如 ...

本人整理了论坛上关于战友所求助的各种质粒载体的图谱，后面所跟着的网站都是含有前面名称载体的详细图谱，希望对大家能有帮助！质粒pGEM-4Z载体图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5198013_0.htmlpGEX-4T-2载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4211077_0.htmlpGEX-4T-1载体图谱：htt ...

我5月18号向一位韩国Han-Yang大学的教授索要两个基因的质粒。得住于我们园子里面很多贴子的帮助，在他们的帖子的帮助下，今天（6月2号）老外终于把质粒寄来了。前后仅仅半个月和老外的接触，让我深刻体会到国外专家教授的那种科学无私的精神。把与他来往通信贴出来，供以后需要的朋友参考。也宣传一下这位教授（Sang-Hun Lee MD.PhD）的科学无私精神。Sent: Sunday, May 18, 2008 12:34 PMDear Dr Lee,I am wor ...

对于刚开始做实验的人来说，收集资料比不可少，然而现在重复性资料很多很杂，要想在较短的时间内获得更过的信息，就必须找到高效的信息资源，我以下的内容也是从各种渠道收集来的资料，我把它们做了整理，截取了其中比较有价值的内容进行编排，希望你看过之后能对核酸杂交有个全面的认识，在做实验时少犯错误。核酸杂交（Nucleicacid hybridization），又称核酸分子杂交。原理：是核酸变性和复性理论。双链的核酸分子在某些理 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所 ...

摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成 ...

祝贺gb2003、wh2008成为《实验技术中的惑与获》一书主编！期待他们的作品早日问世！*****************************************************************************主编征集活动回顾：全园征集主编：丁香园联手人民卫生出版社打造《实验技术中的惑与获》一书在实验过程中，你是否曾经有过诸多“困惑”？在消除困惑的过程中，你取得了哪些“收获”？和大家分享你在实验过程中的惑与获，启示后来人！ 实验技术的设计和操作是一个不断探索与 ...

《分子克隆参考》编写已经进入收稿阶段，请各位战友抓紧时间编写，计划在年底前出书，收稿截止至12月15日。已经PM给报名参加撰写的战友，请将文稿用word发送至我的邮件，或以附件形式贴在跟帖中。同时希望你们在以下贴中回帖，以便加分（初步定为5分）和核实内容，违期将示为自动放权，谢谢您的合作！请各位斑竹根据目前收稿情况选择几章较熟悉的，然后我再具体安排章节进行校正审稿，特殊章节（不属于实验技术范畴）再讨论，也请战友投稿 ...

玛丽和乔是一对孪生子，她们拥有相同的遗传学特征而且共同生活在一个幸福的家庭里。随着他们的不断成长，两个人都非常喜爱体育和艺术，同样学习成绩优良而且几乎在每一个方面哪怕是细节方面都显示出了惊人的相似。然而等到成年以后，她们的生活和个性却产生了明显的差异：在玛丽二十岁出头的时候，一件恶梦般的事情发生了，她被诊断患有精神分裂症。类似这样的例子长期以来一直使遗传学家们感到困惑：尽管拥有相同的DNA甚至常常是同样的成 ...

1. 什么是Reads?高通量测序平台产生的序列就称为reads。2. 什么是Contig？拼接软件基于reads之间的overlap区，拼接获得的序列称为Contig（重叠群）。3. 什么是Scaffold？基因组de novo测序，通过reads拼接获得Contigs后，往往还需要构建454 Paired-end库或Illumina Mate-pair库，以获得一定大小片段（如3Kb、6Kb、10Kb、20Kb）两端的序列。基于这些序列， ...

15天构建三个重组质粒经验－－态度决定成败－－献给刚刚进入实验室的新战友前言：我自己的课题是单克隆抗体的制备及其初步应用，总共花了六个月的时间基本做完。做完了之后我想现在单抗的文章不可能发到比较好的杂志，就想能不能利用剩下的将近一年的时间来再做一个比较好的课题。下面是从我的试验记录上面摘抄的一部分，也就是构建载体的这一段时间所记录的东西。第一天：同实验室的一位同学是做某蛋白上面的一段的免疫活性的研究，我就像我 ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。常见的做法是在合成cDNA的双链后在两端连上接头，利用已知的接头序列再进行扩增 ...

第一章　质粒DNA的碱裂解法提取与纯化——【核酸基因技术版】已有zein 和newdragon 编写初稿，请两位战友商量并及时更新，采用一个版本！第二章　基因组DNA的碱裂解法提取与纯化——【核酸基因技术版】已有zein 编写初稿，请及时更新！第三章　真核细胞DNA的制备与定量——【核酸基因技术版】已有yujz149 编写初稿，请及时更新！第四章 噬菌体DNA提取——【核酸基因技术版】第五章　核酸电泳——【核酸基因技术版】已有wangjun报名 编写初稿！第六章　感受 ...

本人倾情上传本校基因工程专业的试题及答案。作为送给核酸技术讨论版的礼物。希望版主加分。基因工程与基因体外表达练习题及其答案一、填空题1． 基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2． 基因工程的两个基本特点是： (1)____________，(2)___________。3． 基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。4． 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各 ...

原理： 如何获得高的大肠杆菌感受态——可算是【一块砖头】吧 感受超级感受态细胞的制备 感受超级感受态细胞的制备1 超级感受态制备2 E.coli感受态：一步法制备感受态： 一步法制感受态急－关于感受态细胞 关于一步法制感受态的疑问 我所用过的最简单的制备感受态的方法！CaCl2法： 感受态细胞的制备 【鸡毛蒜皮】之6 Ultra-感受态 交流：大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法 因为最近数次制作感受态转染生长失败，求助精英们的标准制作方法。多谢！ 分子克隆第三版中感受态 ...