全部

说是成像术，其实就是拍照，从最常规的简单的EB染色，CBB染色，到荧光成像，化学发光，再到最危险的同位素成像等，原理都是差不多，即条带和背景之间信号的差异，只是过程和要求不同而已从灵敏程度来划分常规染色 ug-ng级荧光 ng-pg级化学发光 pg级同位素 pg-fg级做科研过程中，如果没有其他因素的限制，每人都希望检测灵敏度越高越好，这样真实程度也就越高，越不容易出现漏检的情况，能决定科研项目是否有必要进行下去的可能等等，所以我 ...

在正文开始之前，请允许小妹我简单介绍一下个人情况，顺带为即将独自一人做此实验的xdjm们打打气。小妹我上无师兄师姐（上届师姐于我开始做实验时已毕业），下无师弟师妹（下届师弟师妹尚未开学），由于种种原因被老板发配到外院一个生物治疗中心进行我的实验。在我开始做Western时，制胶器及转膜仪等均未开封，老师们均表示以前也未做过Western。所以我是第一个吃螃蟹的人，吃苦或许是注定的。我自己找了一个常做Wester ...

工作原理蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶 ...

以前自己总结的Western Blot经验。原先看到版上WB资料泛滥，不想发了。但是后来想想存在电脑里也是浪费，还不如共享一下：）希望对大家有用！1、缓冲液的选择，是用PBS/PBST，还是用TBS/TBST？（1）PBS/PBST不适合AP系列，TBS/TBST适合AP和HRP体系。（2）另外,做磷酸化蛋白的WB，PBS不合适。2、如果用HRP体系，那么不能用叠氮钠做防腐剂。因为叠氮钠会抑制HRP的作用。3、WB中抗体的选择：单 ...

我做了半年western blotting了，p53，p15都能做出来，就是做不出来p21和p27.万般无奈，买了CST的9932#cell cycle sample kit，可还是做不出来。上周给CST发了质量投诉报告，老外处理的很积极，5天之内就给我发来了反馈意见。我的操作基本上是按照CST的说明书进行。只有一点不同，我制备蛋白样品的时候用1毫升注射器在冰浴中反复快速抽吸RIPA-细胞悬液，直到液体清亮为止。我没有按说明书上 ...

双向电泳的第一向IEF 电泳采用IPGphor，实验将变得很简单。IPGphor 包括半导体温控系统(18°C-25°C)和程序化电源(8000V，1.5mA)。可采用普通型胶条槽一步 完成胶条的水化、上样和电泳，大大减少操作步骤。IPGphor 一次可进行12 个胶条槽的电泳(7, 11, 13 ，18 ，24cm)，因采用高电压(8000V)，可缩短聚焦时间。最新推出 的通用型杯上样胶条槽因采用可移动的上样杯和电极，适合任何长度的IPG 胶条，尤其适合极性等电点 ...

～～广～而～ 告～ 之～～本帖后续已转至新版本－－ 【专帖】蛋白版无人应助帖￥￥加分从优，每周更新，请勿跟帖 请战友于新版本阅读应助规则和更新信息 2006-10-20周一至2006-11-26周日 2006-11-29整理总无应1 【求助】为什么用碘染淀粉酶会显紫红色？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=7566374&sty=1&tpg=8&age=02 【求助】如何进行蛋白质定量动态的观察？http://www.dxy. ...

蛋白质提取与纯化技术　　选择材料及预处理　　以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析，有机溶剂提取，层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的 ...

关于这个主题想了很久，联想到篮球公园，因拟此题。想了很多方面，总觉得还是大点好，这样可以容纳更多观众与选手，呐喊、助威，才能畅所欲言，充分享受自由的空间，否则就像我们的宿舍一样狭小，大家都不愿意呆，就是回去了，也就是睡觉（不说话，哈哈）SELDI的出现，也就一、两年的事情，现在还没有人去关心他的原创，就像MALDI在它没被大家接受并被证明是蛋白质分析领域强有力的工具之前，没有人关心田中耕一一样。在基因组学取得巨大成功之 ...

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂一、菌体的裂解1、怎样裂解细菌？细胞的破碎方法1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。2.玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再 ...

WESTERN BLOT 操作1一 裂解细胞提取蛋白.1试剂/溶液裂解液10ml 10% SDS10ml 甘油10ml β-巯基乙醇8ml 0.5M Tris Ph6.81ml 0.1% 溴酚蓝51ml 单蒸水2方法1)将培养的细胞消化离心,数量需达到106,(可用PBS洗一次.)2)重悬细胞于100μl加热得裂解液,搅拌并煮沸5-10分钟,破坏DNA.3)冷却(但不能在冰上,否则SDS会沉淀),离心收集液相.4)振荡混合.5)得到样品.6)样品储存于-20度备用.二 SDS-聚丙酰 ...

Difference Gel Electrophoresis (DIGE)即差异凝胶电泳是目前2D领域相当热门的一项技术，可以说它的出现消除了传统双向的一些弊端，使得好多实验室对双向重拾信心:P先简要介绍一下DIGE技术的历史和路线。DIGE技术最早在1997年由Jon Minden实验室提出，后来Amresham成为此项技术的主要推动者，其技术路线是将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料（其中Cy2 作为用Cy3、 ...

争做“超离达人” 有奖活动超速离心机是实验室常见的分离纯化工具，密度梯度离心是利用超速离心机分离纯化生物小分子的常用方法，如蛋白、病毒、核糖体、线粒体……现在，您是怎样制备密度梯度液？您是怎样收集样品条带？手工吗？北京五洲东方公司的全自动密度梯度制备和分离系统，能够1min内快速制备6管线性密度梯度，无扰动无层流精确分离样品组分条带，实现密度梯度离心全自动化。带着这个问题，让我们走进“超离达人”有奖活动！本期活动邀请丁香 ...

PubMed医学文献检索服务系统，其检索内容包含MedLine，PreMedline（不含Mesh检索主题词）医学文献数据库及其他电子出版文献。1.PubMed基本检索方式(Basic PubMed Search)进入PubMed基本检索方式主页，在检索框中可以输入任意词，包括文献作者，出版杂志等：键入一个或多个检索词(可以为任意词)，如protein disulfide isomerase ,也可以输入缩略名如pdi等；输入多个词 ...

花了点时间整理了园内有关考染的帖子，拿出来共享，希望对刚动手做WB的战友有所帮助。12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇 30ml冰乙酸 10ml加ddH2O至 100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇 30ml冰乙酸 10ml加dd H2O至 100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。（2 ...

为了方便战友，方便版面管理，经过蛋白技术讨论版几位主任协商一致决定于近期对蛋白技术讨论版版面进行整理，规范发贴，请大家在发贴求助或分享资料时注意以下几个方面：1 请您在发贴前务必对发贴内容在版内或丁香园进行全面搜索，检查是否已经有过类似内容的讨论，以免造成重复。对重复发帖，重复求助锁贴扣分处理，有特殊情况请pm本版主任 2 发贴时请规范发贴格式，对于标题，请在其前方选择相应的分类标记，如：【原创】、【转帖】、【求助】、【求购】、【建议】、 ...

我提出这个话题是因为见到了很多人问到关于磷酸化的问题，我在此抛砖引玉，希望大家在这方面有心得的多谈一谈。看了觉得好可千万不要让它沉了。 :-P:-D:D:D①如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。②做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用 ...

western blot是现在实验技术中较常用但又不好控制的实验技术。近一月，一直在攻克这个高地，目前尚在努力中，有些心得想给大家聊聊。希望对大家的实验有点点帮助。1)蛋白提取和定量：A.组织蛋白提取过程中，匀浆是一个多因素影响的过程，除了根据实验目的要加入各种蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等之外，匀浆操作本身也有讲究。在其他条件都一致的情况下，匀浆操作尽量是一个人进行（手法一致，否则蛋白浓度和含量有差异）。B.所提取的蛋白 ...

疏 水 层 析1、疏水层析是根据不同蛋白质的疏水力强弱不同来分离的。在高盐离子强度的情况下，蛋白质的疏水基团充分暴露与填料的疏水介质相互作用，从而结合在柱子上。不同蛋白质的疏水性强弱不同从而导致其与柱子填料的结合力也不同。随后，逐渐降低洗脱缓冲液的盐离子强度就可以将不同的蛋白分布洗脱下来，形成一个个的蛋白质洗脱峰。2、柱子的装填：如果是预装柱，就不存在装柱的问题了。不是，则从头开始：首先，把柱子洗干净，一定要洗干净，不然会出现 ...

这篇配方是我原发在这儿的http://www.dxy.cn/bbs/thread/3193927怕帖子沉了，搜索了一下就开了一个新主题。另有Tricine SDS-PAGE凝胶配方（10％）的配方，有战友需要话我再发出来 。希望用了这个配方的战友如果效果好的话请跟贴说明，效果不好的话，我尽可能帮助战友们分析一下问题，反正这是我实践过的东西，不应该跑步出来的呀^_^另外Tricine SDS-PAGE16.5％是我见过最浓的Trici ...