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WESTERN BLOT 操作1一 裂解细胞提取蛋白.1试剂/溶液裂解液10ml 10% SDS10ml 甘油10ml β-巯基乙醇8ml 0.5M Tris Ph6.81ml 0.1% 溴酚蓝51ml 单蒸水2方法1)将培养的细胞消化离心,数量需达到106,(可用PBS洗一次.)2)重悬细胞于100μl加热得裂解液,搅拌并煮沸5-10分钟,破坏DNA.3)冷却(但不能在冰上,否则SDS会沉淀),离心收集液相.4)振荡混合.5)得到样品.6)样品储存于-20度备用.二 SDS-聚丙酰 ...

Difference Gel Electrophoresis (DIGE)即差异凝胶电泳是目前2D领域相当热门的一项技术，可以说它的出现消除了传统双向的一些弊端，使得好多实验室对双向重拾信心:P先简要介绍一下DIGE技术的历史和路线。DIGE技术最早在1997年由Jon Minden实验室提出，后来Amresham成为此项技术的主要推动者，其技术路线是将样品在电泳前标记Cy2、Cy3 和Cy5 这3 种荧光染料（其中Cy2 作为用Cy3、 ...

争做“超离达人” 有奖活动超速离心机是实验室常见的分离纯化工具，密度梯度离心是利用超速离心机分离纯化生物小分子的常用方法，如蛋白、病毒、核糖体、线粒体……现在，您是怎样制备密度梯度液？您是怎样收集样品条带？手工吗？北京五洲东方公司的全自动密度梯度制备和分离系统，能够1min内快速制备6管线性密度梯度，无扰动无层流精确分离样品组分条带，实现密度梯度离心全自动化。带着这个问题，让我们走进“超离达人”有奖活动！本期活动邀请丁香 ...

PubMed医学文献检索服务系统，其检索内容包含MedLine，PreMedline（不含Mesh检索主题词）医学文献数据库及其他电子出版文献。1.PubMed基本检索方式(Basic PubMed Search)进入PubMed基本检索方式主页，在检索框中可以输入任意词，包括文献作者，出版杂志等：键入一个或多个检索词(可以为任意词)，如protein disulfide isomerase ,也可以输入缩略名如pdi等；输入多个词 ...

花了点时间整理了园内有关考染的帖子，拿出来共享，希望对刚动手做WB的战友有所帮助。12.5％考马斯亮蓝染色液的配制（含30％甲醇，10％乙酸）考马斯亮蓝R250 0.125g甲醇 30ml冰乙酸 10ml加ddH2O至 100ml染胶1h~2h脱色液配制（含30％甲醇，10％乙酸）甲醇 30ml冰乙酸 10ml加dd H2O至 100ml注：1. 染色液可回收利用；室温保存即可；甲醇可以用乙醇代替。2.其它脱色液：（1）用水脱色，但效果非常不好，建议不要用。（2 ...

为了方便战友，方便版面管理，经过蛋白技术讨论版几位主任协商一致决定于近期对蛋白技术讨论版版面进行整理，规范发贴，请大家在发贴求助或分享资料时注意以下几个方面：1 请您在发贴前务必对发贴内容在版内或丁香园进行全面搜索，检查是否已经有过类似内容的讨论，以免造成重复。对重复发帖，重复求助锁贴扣分处理，有特殊情况请pm本版主任 2 发贴时请规范发贴格式，对于标题，请在其前方选择相应的分类标记，如：【原创】、【转帖】、【求助】、【求购】、【建议】、 ...

我提出这个话题是因为见到了很多人问到关于磷酸化的问题，我在此抛砖引玉，希望大家在这方面有心得的多谈一谈。看了觉得好可千万不要让它沉了。 :-P:-D:D:D①如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。②做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用 ...

western blot是现在实验技术中较常用但又不好控制的实验技术。近一月，一直在攻克这个高地，目前尚在努力中，有些心得想给大家聊聊。希望对大家的实验有点点帮助。1)蛋白提取和定量：A.组织蛋白提取过程中，匀浆是一个多因素影响的过程，除了根据实验目的要加入各种蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等之外，匀浆操作本身也有讲究。在其他条件都一致的情况下，匀浆操作尽量是一个人进行（手法一致，否则蛋白浓度和含量有差异）。B.所提取的蛋白 ...

疏 水 层 析1、疏水层析是根据不同蛋白质的疏水力强弱不同来分离的。在高盐离子强度的情况下，蛋白质的疏水基团充分暴露与填料的疏水介质相互作用，从而结合在柱子上。不同蛋白质的疏水性强弱不同从而导致其与柱子填料的结合力也不同。随后，逐渐降低洗脱缓冲液的盐离子强度就可以将不同的蛋白分布洗脱下来，形成一个个的蛋白质洗脱峰。2、柱子的装填：如果是预装柱，就不存在装柱的问题了。不是，则从头开始：首先，把柱子洗干净，一定要洗干净，不然会出现 ...

这篇配方是我原发在这儿的http://www.dxy.cn/bbs/thread/3193927怕帖子沉了，搜索了一下就开了一个新主题。另有Tricine SDS-PAGE凝胶配方（10％）的配方，有战友需要话我再发出来 。希望用了这个配方的战友如果效果好的话请跟贴说明，效果不好的话，我尽可能帮助战友们分析一下问题，反正这是我实践过的东西，不应该跑步出来的呀^_^另外Tricine SDS-PAGE16.5％是我见过最浓的Trici ...

1．材料试剂：ZipTipMC，ZipTipμ-C18 为millipore公司产品。磷酸化蛋白β-casein蛋白为sigma产品，纯度90％。Trypsin为德国Roche诊断公司经修饰的测序级的酶（产品编号1418025），硝酸鉫（Ga(NO3)3）为Aldrich公司产品；实验用水为Milli-Q纯水器制备的超纯水。色谱纯乙腈为美国Fisher Scientific 产品；a-氰基-4-羟基肉桂酸(a-CCA)为Bruker提 ...

做了两个月的western blot，在跑SDS-PAGE中，几乎遇到了各位战友在站内提到的所有问题（比如胶聚合速度过慢，胶聚合不均匀，胶孔漏样，蛋白带笑脸状等等）。虽然SDS-PAGE做了这么多遍，可每次都有不同的问题出现，所以很是佩服自己“创造”问题的能力。在此把这些问题归纳一下，算是总结经验，也算是给总是失败的自己打打气，更是想把这些经验教训与各位战友分享，希望能给斗争在SDS-PAGE中的战友一些启发，也希望实验 ...

(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)技术在活细胞生理条件下无损伤的研究蛋白质-蛋白质间相互作用》FRET基本原理荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态，在该电子回到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量向邻近的受体分子转移（即发生能量共振转移）。下面以GFP的两个突变体CFP（cyan fluorescent pr ...

watermark分子生物学基础 4.46Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAI.ppt蛋白质和DNA的关系 4.88Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAIII.pptDNA复制（第一讲） 1.28Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/Replicatio ...

对蛋白组学方面的新手很有用。MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, Mar. 2002, p. 39–63Molecular Biologist’s Guide to ProteomicsPaul R. Graves1 and Timothy A. J. Haystead1,undefinedDepartment of Pharmacology and Cancer Biology, Duke University,1 and Serenex Inc.,2 Durham, North Carolina 277 ...

你注意过以下技巧吗?1. Milk-based blockers may contain IgG that can cross-react with anti-goat antibodies. This can significantly increase background and reduce antibody titer. Milk may also contain endogenous biotin or phospho- epitopes that can cause higher background.2.To stretch the O ...

本人原创制作PDF，内容链接十分齐全，阅读十分便利。感谢墨尔本大学分子生物学实验室的网页内容。同时支持icesugar75 Frederic codegreen 三位版主的工作。（read MM ：chhualongdxy）ContentsIsolation of DNA fragments using glass milk (GENE-CLEAN) SOUTHERN BLOTSOUTHERN ANALYSIS OF MOUSE TOE/TAIL DNA Northern transfer p ...

Proteomics in Practice: A Guide to Successful Experimental Design, 2nd, Completely Revised EditionShort descriptionStill the only concise practical guide, this edition combines the best features of a laboratory manual with a concise reference for successful experimental des ...

以下是关于蛋白质测序的论坛帖子,希望有所帮助:蛋白质测序公司http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1424257&sty=3&keywords=%B5%B0%B0%D7%D6%CA+%B2%E2%D0%F2蛋白质测序联系http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/50023_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65 ...

无需破坏胚胎，能够量身定做，没有排异反应，甚至可以克隆某年某月的某一天，脑子坏了，不再识字；从口腔刮点细胞，导进几个转录因子，变成干细胞；回种到脑子里，神经再生，突触再连，恍然大悟—原来这就是今夏炒得沸沸扬扬的诱导干细胞（induced pluripotent stem cell, iPS cells），为包括Nature在内的各大媒体竞相报道，为大大小小实验室人员广泛研究讨论，丁香园干细胞版亦有精华讨论【新进展】干细胞新进展－－成体细胞 ...