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分子克隆技术步骤在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。克隆在生物学中其名词含义系指一个细胞或个体以无性繁殖的方式产生一群细胞或一群个体，在不发生突变的情况下，具有完全相同 ...

实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步骤，造成IPTG和X-Gal滞销主要是蓝白斑筛选存在假阳性的情况，IPTG和X-Gal的购买、配制、涂布也增加了实验的步 ...

1 DNA条带不见或很淡，可能的原因及解决的方法：a DNA marker 上样量不够按照说明书加样，或者根据自己的实验样品调整加样。b DNA电泳跑出凝胶电泳时，将溴酚蓝跑到胶长的2/3处即可停止电泳。更小的DNA片段可能需要电泳的时间更短。比如1/2c DNA条带被示踪染料所遮盖选用不同的电泳loading dye，使待检测的DNA样品避开示踪染料的干扰，或者适当降低loading dye用量。d 凝胶中未加核酸染料，或者后染时核酸染色不均匀 ...

杭州公立的男科医院有哪些【浙江省军区医院咨询QQ2641143845 电话0571-87923139】性爱的目标是让双方都获得快感和愉悦，时间不是那么重要，只要合理分配性爱时间，哪怕仅有十多分钟，都能让双方达到高潮。专家介绍说，完整的性爱包括三部分，前戏、实质性交和后戏。总的来说，性爱时间因人、因时而异，一般在二三十分钟左右即可。从时间分配上看，可以遵循2∶3∶2的原则。以20分钟为例，前戏应占6分钟左右，实质性爱为八九分 ...

在蛋白质组学研究中,如果使用高通量方法会得到大量蛋白质数据, 这就需要采用生物信息学的方法进行处理. 这里介绍一篇文章,希望能起到抛砖引玉的作用, 让大家讨论一下还可以用那些方法进行生物信息学处理.在这篇论文中， 应用了合并2种检索， 非标记定量， 相对量比较（normalized and non normalized），GO term 比较， 3种算法的蛋白定位预测比较， 通路分析，蛋白修饰(包括氨基酸修饰，和蛋白降解修饰)。另外在结果表格中还列出信号肽， 跨膜区，以及 ...

【资源】蛋白质技术讨论版资源共享—常用蛋白技术电子图书 1分共享主要资源：1.蛋白质纯化与鉴定实验指南2.蛋白质电泳实验技术3.蛋白质技术手册4.抗体技术实验指南5.2D electrophoresis & 2D workshop troubleshooting6.Protein Purification Protocols 2nd ed7.Pichia Protocols8.Proteome Analysis--uploaded by hosea5分共享主要资源： ...

I. 2D电泳操作手册BIORAD英文版BIORAD中文版Amersham英文版Amersham中文版Amersham的DIGE工作手册Dr. Gorg英文版双向电泳手册中文版（感谢国家生物医学分析中心于景华老师提供）Trouble shooting部分Dr.Gorg's trouble shootingAmersham Biosciences公司的关于“2D workshop troubleshooting”的Powerpoint材料 ...

感谢pinghw，本帖已经锁定，如果有战友继续上传，请到http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=2457613&sty=1&tpg=1&age=0跟帖！谢谢大家的积极参与！ 蛋白版的公共邮箱为：dxyprotein@163.com ，大小2G,最大附件30Ｍ。点击此处去邮箱为方便大家上传及下载资料，此邮箱已经开放使用，公共邮箱的设想及初步使用方法的相关内容请参看下帖，欢迎大家多提宝贵意见，谢谢 ...

本帖后续更新临时转移至【公告】蛋白版导读--发帖前必读==暨精华帖分类汇总特此公告友情提示：1．为规范起见，特将专人分类改为专题分类，分导读和专业讨论2种。2．部分专题帖因涉及多个领域被重复归类。3．如有分类建议、分类错误或侵犯 个 人 权 利 请直接pm本人，定将致谢/致歉并即刻修改。【蛋白提取】导读首帖：2005-12-06 菌体/细胞裂解法汇总 专业首帖：2004-05-12 提蛋白酶时，缓冲液中为什么要加入精氨和亚精氨以及苯甲脒【凝胶电泳】导读首帖： ...

根据自己的实验体会，总结做好WB的一些心得，与大家分享，不当之处欢迎批评指正。叙述的思路就是围绕着实验的每个步骤展开，这样可能更具体些。1．配胶: 该部分较为重要的是配制凝胶时要充分混匀，此外应保证试剂的新鲜。常出现的问题有：A.凝胶出现花纹：此时应检查原料中过硫酸铵（AP）粉末是否受潮B.凝胶聚合时间较长：聚合时间由AP以及TEMED决定，通常在30min左右，AP不新鲜会导致聚合变慢：此外还需注意环境的温度也很重要， ...

～～～热烈欢迎GE公司於莉女士光临蛋白版～～～通过我版热心战友baiy引荐，我们有幸邀请到GE公司专门从事蛋白质科学研究的於莉女士光临蛋白版进行专题讲座。在此丁香园蛋白质技术讨论版全体版主代表蛋白版会员对于於莉女士的到来表示热烈的欢迎，并对於莉女士带给我们的精彩的讲座致以由衷的谢意。本次讲座将开设两帖：1. 本帖： 於莉女士将在本帖进行讲座； 广大战友可以在本帖跟贴提问。2. 答疑贴： 我们将定期收集整理战友提问统一开贴，於莉女士将 ...

本帖姐妹篇：【原创】蛋白质纯化武器－设备篇（欢迎补充）http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=15120322&sty=3&keywords=%B4%BF%BB%AF%CE%E4%C6%F7（这篇小文可是上过丁香园的头版哦，还曾给配了个好看的图片，感谢）【资源】蛋白质纯化武器－资料篇（欢迎补充）http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17703087条条大路通罗马，纯化之路千万 ...

下载帐号密码见以下链接：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=4513198&sty=2丁香园生化与分子生物学FTP资源列表(9 folders, 0 files, 0 bytes, 9.71 GB in total.)├─软件(3 folders, 6 files, 32.18 MB, 49.30 MB in total.)├─常见分子生物学参考书(3 folders, 6 files, 46.86 MB, 1.10 GB in total.)│?│?蛋白质技术手册.pdf5.94 MB│?│?Molcular ...

最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。从园子里也学到不少。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正:)1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。2. 第一次失败。第一次做诱导的时候，重复了很多次，但总是诱导不出来。PCR，酶切都正确。但没等测序 ...

发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology标　题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（一）发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST本文献给YL引子　2000年5月6日，我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书，书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪，里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到，这本书实际上是冷泉港实验室开设的 ...

聚乙二醇具有较广的分子量分布，随着平均分子量的不同，性质也产生差异，当分子量小于1000Da时，聚乙二醇是无色无臭粘稠的液体，高分子量的聚乙二醇则是蜡状白色固体，固体聚乙二醇的熔点正比于分子量，逐渐接近67℃的极限。毒性随分子量的增加而减少，小于400Da的 PEG在体内会经乙醇脱氢酶降解成有毒的代谢物，而分子量大于1000 Da的PEG经过多年应用于食品业、化妆品业和制药业证明没有毒性。聚乙二醇分子中含有大量乙氧基， ...

个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）1、 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺，应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g，N，N-亚甲叉双丙稀酰胺1g，加H2O至100ml。)储于棕色瓶，4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配 ...

由于大型串联质谱的飞速发展， 双向电泳目前已经逐渐让位给其他的各种非胶系统分析手段，但是双向电泳在很长一段时间内仍然会是我们在蛋白质组学领域中不可缺少的一种分析手段。 这个专题希望能够给大家在2D中遇到的一些问题提供一个快速索引，并且共同讨论您在2D中遇到的问题及解决方案！个人进入蛋白质组学领域也有6-7年的时间了， 对于双向电泳技术，从最开始的花篮式电泳到2D-IPG-PAGE， 再到现在的2D-DIGE技术都比较熟悉。 使用 ...

一直以来，园子里一直有很多战友在关于包涵体蛋白的纯化以及透析复性这块存在很多疑问。我从事包涵体蛋白的纯化以及复性这块的时间比较长，有一些经验，希望能与大家一起分享、讨论。大家有什么问题和经验也可以提出来，共同探讨一下。我先把园子里关于包涵体纯化和蛋白复性这块非常有价值的帖子整理出来供广大战友参考。包涵体纯化与复性：色谱柱纯化包涵体包涵体纯化的方法与肝素有亲合力的包涵体的纯化包涵体纯化复性的一篇文章HIS包涵 ...

近来看到好多“熟悉”的问题，不断的被询问。猜测是因为丁香园不断的壮大，好多新的战友不断加入。但是可能大家一时并没有养成搜索的好习惯，于是许多问题不断的被翻出。其中蛋白表达问题是问的最多的，虽然关于这个问题的帖子园子里是汗牛充栋了。建议大家在询问之前能养成搜索的好习惯，毕竟高手们并不是时时都在的。在这里我把关于蛋白表达问题做一个总结。这里的帖子都是含有加分的回答，很有参考价值。普通的帖子没有整理。一、原核蛋白表达问 ...