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realtime 做snp，对一些新手来说，也许在众多影响因素中，手法问题是一个比较常见的问题，本人属于初级菜鸟，在实验室才呆 不到3月，实验做了才不到半月，realtime做snp已经做了10板左右（96孔板），仅仅从图像上看，结果不满意者十有六七，主要的问题在于1:）荧光曲线起步没在起点，也就是说起点不整齐，线比较乱事业个问题。2）就是荧光曲线太平直，也就是说一些实验做的也许根本就没产物生成，虽说分型有，但是再重复做，有时 ...

综合性医药卫生1.中华医学杂志 2.第四军医大学学报 3.北京大学学报.医学版 4.第二军医大学学报 5.第三军医大学学报 6.解放军医学杂志 7.中国医学科学院学报 8.复旦学报.医学版 9.同济医科大学学报（改名为：华中科技大学学报.医学版） 10.白求恩医科大学学报（改名为：吉林大学学报.医学版） 11.湖南医科大学学报（改名为：中南大学学报.医学版） 12.华西医科大学学报（改名为：四川大学学报.医学版） 13.第一军医大学学报 14.苏州医学院学报（改名为：苏州大学学报. ...

平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19的Hinc ...

PCR污染与对策　　PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂的污染: ...

1自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一，而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带（如形成引物二聚体带），不出带或出带很弱，等等。现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。一般来说，专 ...

PCR技术及其在临床诊断应用中的进展　　　王保龙　　聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）技术自1989年开始被应用于临床检验以来，以其快速、简便、灵敏等优点很快地成为临床实验诊断学的一个技术热点。目前，已广泛用于涉及到核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和治疗监测。PCR技术虽然作为一种新生的高新技术而代表临床实验诊断学发展的又一里程碑，但十多年的临床实践表明，传统的PCR技术本身还存在着一些问题， ...

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术便是一种具 ...

from sangon当PCR结果不甚满意时，首先检查以下几方面并遵照执行：将PCR反应的试管与反应板紧贴。当酶反应混合物以70℃“热启动”开始循环时，切记在加入酶后稍微振荡一下，因为在0.2-ml的PCR管中不能均匀传热。不要随意减少dNTP的用量，它是一个系统的因素，必须与其它成份保持平衡。对于有问题的PCR反应，例如模板的量少，模板不纯和环状模板等，先尝试加Taq酶前的体系进行预变性，后加模板进行正常PCR扩增。 ...

PCR产物克隆方法平端连接　　通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用 ...

适用条件：RT-qPCR荧光定量。常用软件或网站：NCBI在线引物设计，IDT在线引物设计，sigma在线引物设计、primer3在线引物设计、primeprimer 5.0。根据我最近大半年来设计了无数对引物的经验来看，我想说的是，以上任何一种方法设计的引物几乎均可在一个较低的退火温度（例如52℃退火的三步法）下实现PCR扩增，只不过是扩增效率以及溶解曲线好与不好的差别。与其每次设计几个基因如果都从52℃开始摸索，且 ...

PCR技术概论聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便 ...

一、 分子生物学Promega: Promega 公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的“老字号”。该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检测；蛋白酶、蛋白激酶、核受体检测，以及描述药物先导物的吸收、分布、代谢、排泄等特征性参数的一系列检测方法。Prome ...

我依据所查的资料，用primer.0设计了以下引物，上游：TGGGACACTGATGAGGGATA 下游：GGCACAAGGCAGACAAAT其中下游链存在错配，这是否会影响扩增结果。麻烦各位看看整体设计否合理？？附：D63902. Reports Mus musculus mRNA... LinksLOCUS MUSEFP 5475 bp mRNA linear ROD 29-MAY-2002DEFINITION Mus musculus mRNA for estrogen-res ...

一提RT-PCR，我便黯然泪下。我参考了一篇外文，用了他的引物，并且这个引物在PRIMER5.0也验证了存在。做了三个月了，却总有非特异性条带，而且比目的条带还要亮。调了很多条件，什么退火温度，镁离子，用OLIGODT，随机引物，下游引物，AMV，MMLV反转录，加DMSO，都不行。做了对照，应该没有污染。发信过去问了原作者，他说他做的没问题。可我偏偏做无法达到只有特异性条带，终于下定决心去测序，结果更是给我一重重的打击。 ...

Making the T-vector:1.Digest 5 ug of vector DNA ( pBluescript ＆ pUC18) with a restriction enzyme that generates a unique blunt end site, for example EcoRV or Sma I ( we prefere EcorV for it's stable activity at 37 C) for 2 hours at 37 C.2.Run the digest on a 1% low-melting-point agarose (use TAE as buffer, because the boric ...

求助 帮设计引物求助 哪为高手帮我设计一下以下序列引物 要求 长度大于等于20bp 上游引物最好在1－100 下游1449－2046 不需要酶切位点 谢谢ggctccgcagagtgaccctttttcttggaaaagcggtggcgagagaagtgaaggtggctgttgggtagggagtcaagactcctggaaggtggagagggtggcgggaggatgagctcgccgggcacagagagcgcagggaa ...

我打算用人的heme oxygenase-1cDNA做目的基因做基因治疗.用RT-PCR从mRNA得到我的目的基因.heme oxygenase-1基因序列如下:1 tcaacgcctg cctcccctcg agcgtcctca gcgcagccgc cgcccgcgga gccagcacga61 acgagcccag caccggccgg atggagcgtc cgcaacccga cagcatgccc caggatttgt121 cagaggccct gaag ...

某基因的序列如下，我设计了一对引物，5 TCGGTTTTCACTGGTTCTCATCC 33 T CGCACTCCTTTCTCTCGCAATG 5想扩增的目的片断是3629－4799 （1170 bp，）不知道能否，请大侠们帮忙看一下，3601 ttttttaatt tcaggatatg gagcttcttc ggttttcact ggttctcatc cagtcctggc3661 tgaccccagt gcaataccta agcaaggtgt ttacaaacaa cc ...

我要对大鼠的IL-18RβmRNA进行RT-PCR现设计了如下两条引物：引物对1：扩增区域 1～522 退火温度59℃。F1ATGCTTAAATCCAGATGTGGCGR1CCCATAAAACAGGGCTACCTCC引物对2：扩增区域600～1113 退火温度58℃F2AGGCTTGTACGTGTGCGATTACR2TTCAATCCAGTGCCAGTAGAGC请各位高手帮我分析分析这两对引物怎样，替我指点指点！谢谢！以下 ...

我想用RT-PCR扩增出某种纤毛虫的制动抗原基因的全长cds通过ncbi查到它的全长cds为(1329bp):ATGAAATATAATATTTTATTAATTTTAATTATTTCTTTATTTATTAATGA ATTAAGAGCTGTTCCATGTCCTGAT GGTACTTAGACTCAAGCTGGATTGA CTGATGTAGGTGCTGCTGATCTTGGTACTTGTGTTAATTG CAGACCTAAT TT ...