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如果大家在用TaqMan做SNP genotyping，应该知道试剂有多贵。有兴趣可以看看这篇文章，一种新的SNP genotyping方法。简单而实用。Biotechniques. 2005 Dec;39(6):885-93. Related Articles, LinksHigh-throughput SNP genotyping by single-tube PCR with Tm-shift primers.Wang J, Chuang K, Ahluwalia M, Patel S, Umblas N, M ...

touchdown PCR即降落PCR，可以选定一个温度范围，如50——35，每个温度2循环，然后在50度15循环。其原理是，随着退火温度的降低，特异性逐步降低，但特异性条带在温度较高时已经扩增出来，其浓度远远超过非特异性条带，随着退火温度的降低，特异性条带优先被扩增。这种方法的退火温度范围较大，在不知道最佳退火温度时比较适用。http://www.espanol.pcrlinks.com/variantes/touchdo ...

多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术及其应用做一综述。1 实时荧光定量PCR技术的方法学1.1 原理 所谓real ...

Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液 1、组织匀浆(1)取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。(2)每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。(3)将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置 ...

钓基因的过程中的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=426195&sty=1&tpg=8&age=0PCR的方法作STR的分型http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=632509&sty=1&tpg=8&age=0RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=6 ...

欢迎您来到PCR技术讨论版！最后更新：2006－01－12为了方便新老战友了解和使用本版资源，节省宝贵的搜索查找时间，同时避免一些有价值的帖子随时间的推移而被埋没，我将PCR版从改版后至今的所有帖子筛选了一遍，将有价值的帖子分别进行了归类整理，设此子版。如果把PCR技术讨论版看作是一本书的话，这个整理结果就是本书的目录或者索引。在发贴之前先，请您一定先检索一下相关话题的帖子，以避免对您时间和资源的浪费。帖子的整 ...

SSCP原理：sscp称为单链构象多态性，它是基于DNA构象来检测PCR产物单链碱基微小差异的方法，因其检测敏感，快速和所需装置简便而在分子生物学各个领域广泛应用。但该方法的试验结果受多种因素的影响，如：PCR产物，温度，电压，PAGE胶的浓度和交联度等，因而重复性比较差。因此在做SSCP时要注意各种条件的一致性。如果有酶切位点的话最好用RFLP方法检测DNA 多态，或是用SSCP与RFLP两种方法相结合，试验结果 ...

为大家提供几个在线设计站点：(1) The Primer Generator (http :/ / www. med. jhu. edu/ medcenter/primer/ primer. cgi)( 2 ) Primers ! ( http :/ / www. williamstone. com/primers/avascript/ )(3) The GPRIME Package ( http :/ / life. anu. au/ molecular/ soft2ware/ gprime. htm)(4) WWW Genefisher ( http :/ / bobiserv. techfak. uni2biel ...

增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列 退火的引物要符合下面的 一些条件：a.足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60%c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMERf. 避免3 ...

高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法——HRM技术应用HRM介绍HRM技术是high-resolution melting analysis即高分辨熔解曲线分析技术，是近年国外兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法。基于高效稳健的PCR技术，HRM不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变、单核苷酸多态性-SNP、甲基化、HLA配型等的分析。HRM ...

找到一个好东东，与大家分享真核细胞DNA的制备与定量制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随 ...

总结了测序中经常遇到的问题及原因分析，希望对大家有帮助！Q:测序结果中为什么找不到引物序列?A:找不到用来测序的引物，这是正常的，因为测序的方法是荧光标记测序法，仪器通过检测 ddNTP 上的荧光来读取所测序列，而引物本身是不被标记的，所以仪器无法检测到；找不到所测片段的扩增引物，这种情况是因为您所采用的酶切位点离所用的测序引物距离太近，一般荧光燃料会干扰几十个碱基的读取，这部分碱基会损失掉，损失掉的序列很可能就包含引 ...

以前受到很多朋友的帮助，尤其是各位老版主老前辈还有各位不知名（指的是园子里无名）的高手，看到众位版主尤其是新版主PCRfan在大洋彼岸也如此热情，真是很感动。但今天又看到还是有很多朋友在愁引物设计问题，特发此贴，非原创，转自37度，稍加修改，请笑纳。注：本人非分生pro，如有错误，请勿诉讼我，可以回贴指正。PCR 引物数据库　　PCR 引物数据库是一个新的数据库，它可以提供各种有关引物的测试，进行最佳引物 设计。你可以浏览以下几部分:　　_A_...

进入丁香园，是从做MSP开始的。从对DNA甲基化的一无所知到MSP实验成功，经历了很多艰难，同时也收获得了不少经验。从丁香园的帖子可以看出，近几年来，国内对DNA甲基化的研究在逐年增加，战友们在实验中遇到的困难也不少。在这里谈一下对MSP,及BSP的一点体会，希望能对新手们有所帮助，也请老手们批评补充。亚硫酸氢盐转化和PCR扩增是MSP,BSP的两个基本步骤。亚硫酸氢盐转化，估计现在做手工修饰的也不多了，试剂盒能 ...

NA序列分析技术是现代生命科学研究的核心技术之一，而双脱氧核苷酸链终止法(Sanger法)是目前使用最普遍的DNA序列分析技术。在基于Sanger法的全自动DNA测序技术中，测序反应产生的DNA片段是荧光标记的，这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离，荧光分子被激发而发光，发出的光信号被检测系统检测。Sanger法的优势在于可以分析未知DNA的序列，且单向反应的读序能力较长，目前的技术可以达到1000b ...

核酸环介导等温扩增技术原理及引物设计与实例烟头整理1．LAMP引物的设计：LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’ 端的F3c、F2c和Flc区以及5’ 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。F3引物：上游外部引物(Fo ...

欢迎来到《PCR技术讨论版》：本版归属于“实验技术讨论区”，以讨论各种PCR技术和PCR相关技术为主。本版的宗旨是为您提供各种PCR的相关理论和实践经验的交流平台！欢迎您参与交流！发贴必读&加分标准： 新手朋友（0~5分），加分从优 --- 跟丁香园大政策保持一致1、欢迎介绍自己原创资源（包括原创文章、课件、ebook、技术经验、心得体会等），斑竹视情况加1～5分。2、求助或发布资源前请先用 功能在本版检索一下，或到 旧帖资源索引区检索一下（推荐 ...

从用PRIMER premier设计引物到查看您所设计的引物会不会有目的产物，以人的APP基因为例1、打开pubmed http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/ ，在search的下拉菜单中选择 Gene或者直接打开这个链接http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2、输入 APP （或者其他的 待测基因名称或者缩写均可，以下均以APP为例）；点GO，出来的结果是各个物种的APP基因，人的排在第一个 ...

第一章 PCR和RT-PCR基础PCR基础聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生 ...

用的是clontech的kit.3.2.2.1cDNA第一链的合成1)在0.5ml经DEPC处理过的离心管中分别加入tester和driver的mtRNA各2ug，然后加入1ul(10uM) 随机引物(9mer)，70℃温浴2min,然后迅速置于冰上放置2min，然后在每管中加入如下混合物：5×First-strand Buffer 2uldNTPs Mix(10mM) 1ulsterile H2O 1ulAMV Reverse Transcripta ...