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ppcat 人SOD的转录因子已经调控信号途径现在清楚了吗？多谢！sunxjk SOD 有好几种类型,调控信号途肯定也不少.肯定有几个不同的转录因子调节,甚至一个基因都不是一个调空方式.这是一个报道,是否有用.肯定也有相关文献Published ahead of print on February 28, 2008, doi:10.1165/rcmb.2007-0378OCThis ArticleFull TextFull Text (PDF)All Versions of this A ...

wingpuppy 刚刚接触这两个药物实验室没有人做过粗粗看了几篇文献发现条件都不是很一致尤其有的条件一个很成功，另一个却反应细胞全都漂了所以让我很头疼请教一下用过的达人刚开始的时候是不是应该摸一下梯度那么范围一般设计在多少呢，尤其是时间怎么来设定急等，谢谢！lrh75 我也想知道，顶一下wingpuppy 怎么没人回呢自己顶一下吧瓷不旧1992 请问你解决了吗。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以 ...

rainy_winter 我想做某因素对神经干细胞Wnt通路的影响，检测TCF/LEF转录活性打算采用topflash/fopflash的方法，可是用一般的脂质体转染的方法转染率很低，20-30%，也有人说5-10%。想问一下荧光素酶报告基因法对转染率有要求吗？实验条件有限，核转染的方法做不了。我是否可以采用EMSA或CHip的方法来替代荧光素酶报告基因的方法来检测Wnt通路是否被激活？如果发英文文章的话，被认可吗？b ...

alieenlee 我现在做P2Y2受体在癌细胞上的表达，之前PCR出来过很清楚的条带，但是最近细胞状态很不好，硬着头皮加药做了几批，反转录后死活P不出来了，但是actin 一直都不错。想来想去也想不出原因，猜测是因为细胞状态不好导致了这个基因不表达。请问高手们，你们是否碰见过这种现象？这种猜测有道理吗？lwjssry 状态不同时蛋白表达谱是不同的，所以细胞状态非常重要nulidaodi 细胞状态对蛋白的表达非常重要，所以一 ...

yangxiexun 请教各位，看文献说stat3是与肿瘤的侵袭转移有关，我现在只测stat3和其活性形式在高转移肿瘤细胞中的表达情况，这能否说明其与肿瘤的侵袭性有关，此外还需补充什么才能说明问题thomas531 结论可以用POSSIBLE ,MAYBE,之类的词语,在你所检测的肿瘤中如果高于他的正常组织,可以下这样的结论zfyyzz00 建议选几个受stat调控的基因能对肿瘤转移有作用的进行研究，这样才可以说明的的观 ...

hbqh 我想做NF-KB的WB，我买的抗体是NF-KBp65抗体，不是磷酸化抗体，是不是我需要做细胞核的NF-KBp65的量变化，另外我是不是必须选择细胞核内参呢？哪位前辈知道啊，在线等待，谢谢hbqh 自己顶一下hbqh 怎么没有人顶啊，快点回复吧amygdala 相关回答见http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=74&id=12180349&sty=1&tpg=1&age=0本文由丁香园论坛提供，想了解更 ...

flyhigh2007 最近订抗体，TRAF-6，石蜡切片免疫组化，upstate和abcom都有合适的，但是两家公司给的application image彻底把我弄懵了，两张图一模一样，都说是用的自己公司的抗体做的，而且同一张图一家公司说是 colon adenocarcinoma，另一家却说是prostate carcinoma。看来只能通过以往的信誉来选择了。这两家公司抗体的信誉如何啊，谢谢啦xdb86 真有这样的事情啊，我只 ...

小niuniu 有谁测过细胞的钙流啊？您是用什么仪器检测的？我们用荧光分光光度计（LS-55）测量时总是有些不合适，有没有人知道这台仪器适合测钙流吗？junjiexiao 用confocal啊燃料用Fura-2、fluo-3、fluo-4都是可以的啊前面一个为340和380激发后面两个用488就可以了zhengxd 想发高点影响因子的文章的话，最好用膜片钳，如果细胞合适的话！完全的Ca2+电流不是很好测；也可以用钙激活钾电流（I ...

wywdxfsh 我看一般都用细胞系，但是细胞系不能代表正常生理状态下的细胞，所以想用原代细胞转染，不知道行不行...wangp249 可以 难度很大tangboyzu 用脂质体转质粒难度可能比较大，amaxa 公司有一种新的电转仪，可以选购针对不同类型的细胞（包括很多原代细胞）的转染试剂，我转过T细细胞，转染效率还行，就是有很多细胞会死，还是需要摸索条件的；另外一个办法就是选用病毒，根据不同类型的细胞，选对了病毒就没问题本文由丁香 ...

zxlbaby 干扰一个基因表达后，EGFR的表达及tyr1173磷酸化都降低，如何分析？能说此基因具有调节EGFR的表达和磷酸化作用吗？还是磷酸化减少是因为表达减少？郁闷中。求助。amygdala 用WB检测以后最好用条带扫描软件做一个量化统计分析，看看总EGFR和Tyr1173降低的比例是否一致，这样就可以知道是哪种情况了。lilili1979 同意楼上的,可以考虑用磷酸化的/总蛋白的值, 通过此值的比较来分析磷酸化的减 ...

llyun2000 我现在要做nf-kappaＢ的活性，请问，western检测细胞核中的p６５，需内参吗？lwjssry 用组蛋白 H1、H2等wangp249 Lamin A/CLamin Bhbqh 用β-actin可以吗 还想问用什么方法提细胞核啊？amygdala actin是典型的胞质内参，不能用来做核内参。一般用来做核内参的是组蛋白H1、H2等，或者是laminin。组蛋白的分子量一般较小，可根据需要选择。另外，如果要检验质核分离的效果 ...

fanaipinger 我想用LPS刺激THP-1细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活 ,这个试验费事吗？大概需花费多钱，我是学临床的，问这个问题可能比较弱智，请予回答，不胜感激！seagate 我个人认为实验的难点在于如何把NF-kB-luc报告基因转染入悬浮细胞。niu_ren 本人正在做方面的实验,可以共同学习.共转THP-1,293T细胞.fanaipinger 那咱们可以共同交流了，很高兴遇到你。我的QQ号是86 ...

fanyi701019 请问U0126对哪种肿瘤细胞比较敏感，用药的终浓度是多少？用药时间是多少？amygdala U0126对MEK-ERK信号的抑制作用很明显，一般的细胞株都可以使用。终浓度10 μM左右，预处理15-30min。可以根据实际情况作适当调整。feiqi 怎么我看到一篇nature medicine上的一篇论文上是U0126 0.5 μM处理48小时啊？paulin98122 版主您好，请问如何预处理，如果我要长期观察MEK ...

gaolei 我看到一片paper是研究某个蛋白通过抑制ER信号通路，抑制乳腺癌细胞增殖。为了证明这一点，作者向不表达ER的293T细胞中转染ER，ER reporter vector和这个蛋白的表达载体。我想问的是，他为什么不向乳腺癌细胞中转染质粒呢？是因为乳腺癌细胞本身表达ER吗？这有什么影响呢？micaixing 外源的大量转染只是为了确定一下现象在过表达中是否存在，乳腺癌细胞中ER 阴性或者阳性时ER的含量，不同细胞系 ...

ddm_anny 各位大虾们，我最近在做一个基因启动子的活性检测，用的是promega 公司的试剂盒，构建了几个5’逐渐缺失的报告基因，做转染的时候用的是跨物种的T98G cell line, 选择peGFP来估计转染效率，同时用PGL-3-Control和PGL-3-Basic来估计整个测量系统，结果显示转染效率还是可以，主要是PGL-3-Control组的荧光素酶活性值达到25万，同时PGL-3-Basic组的读数还不到100，也就 ...

aaaa2576477 奥运会,使国外邮寄的质粒始终到不了的,很烦人的,不知道有谁知道哪里有的买的.急用!谢谢.其实表达克隆也不太懂的.最好有装好目基因的表达克隆:).fghostyun 复能基因有卖的，广州的。我以前买过，不过买回来最好测序一下验证为好aaaa2576477 谢谢!我看到了.很方便的..太感谢拉..本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：s ...

helsman 我阅读文献中发现在检测某个受体的信号通路是否激活时，用的配体浓度是例如100ng/ml,而在检测具体的功能时却用不同的配体浓度例如200ng/ml,请高手指点，谢谢！amygdala 提高浓度无非是因为200ng/ml时具体的功能更加明显，而100ng/ml的浓度对于激活相关通路已足够，但具体的功能尚不明显。一般不提倡随意改变浓度。helsman 非常感谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿 ...

semiboat 我想阻断此信号通道，在文献中我看到采用了STAT3显性负性技术，是否也可以用STAT3mRNA干扰阻断，但经费都很高，有没有抑制剂什么的能阻断掉，IL-6/MAKP通道我看文献都用抑制剂直接阻断。还有个位有没有作P-STAT3的，我看做信号通道是大家都是用了p-STAT3抗体，为什么不检测STAT3而是检测p-STAT3，非常感谢！！semiboat 望做过的高手解答，非常感谢！！zhuqueleee 1，理论 ...

snowxyh 刚刚做了PC12细胞瞬时转染NF-kB-decoy的DNA，之后加药刺激，然后想要做间接免疫荧光检测其表达，因为转染之后的细胞已经铺满达100%，不是自然伸展的状态了，是不是要把细胞消化下来，重新铺到盖玻片上啊，这时候需要贴壁24h还是要48h呢，因为PC12细胞在贴壁24h后，还不能完全达到自然伸展的状态，而瞬时转染这时候已经过了3-4天了，会不会已经看不出瞬时转染的效果了？哪位师兄师姐做过类似的实 ...

gcc19800119 因为一直没有筛选到突变IkBa质粒的稳定转染株，决定用NFkB抑制剂抑制通路后继续做实验。 因为要做体内和体外实验，目前用PDTC，但是有专家提出，PDTC不是特异性的NFkB抑制剂，研究结果可能有偏差，不能很好的说明问题，现在有点犹豫了。看了专家建议的MECRK产品，关于NFKB的抑制剂也有很多种，有很多也是化学试剂，总觉得也不是特异性的抑制。但是有两种，一种SN50和IKK的多肽片段作为NF ...