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        【求助】u0126使用

        丁香园论坛

        2913
        我的实验需要观察ERK通路在细胞分化中的作用,请问我在用u0126抑制ERK通路时是不是用u0126处理半个小时就可以了,还是一直维持u0126的作用浓度,u0126的抑制作用能持续多长时间,谢谢
        不知道 我也很想知道
        两年前的问题了,还有效不?
        ERK在细胞分化中的作用已经基本明确。
        一般来说正常生长的细胞在生长过程中ERK是激活的,也就是磷酸化的。因此想观察对ERK的抑制作用要先将其去磷酸化,具体操作可以用血清剥夺的方法,将培养基中的血清去掉,也就是细胞换液,换成不含血清的培养基。然后用U0126进行处理(在培养基中加入一定浓度的U0126,具体浓度可以通过做个剂量曲线确定);然后再加入血清,或者能激活ERK的因子等,与未加入U0126的细胞对比ERK的磷酸化程度。
        具体U0126可以维持多长时间,要看你多长时间换液了。一般来说两天是没有问题的。因为我做实验的时候是两天换一次液。超过两天,会有怎样的情况,不好说。但是先加入U0126之后 半小时在刺激ERK是不会引起其磷酸化的。
        所以,综上所述,0.5小时~2天之间,抑制作用是有把握的。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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