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        【求助】转染率低,能用topflash/fopflash检测TCF/LEF转录活性吗?

        丁香园论坛

        3111
        我想做某因素对神经干细胞Wnt通路的影响,检测TCF/LEF转录活性打算采用topflash/fopflash的方法,可是用一般的脂质体转染的方法转染率很低,20-30%,也有人说5-10%。想问一下荧光素酶报告基因法对转染率有要求吗?实验条件有限,核转染的方法做不了。我是否可以采用EMSA或CHip的方法来替代荧光素酶报告基因的方法来检测Wnt通路是否被激活?如果发英文文章的话,被认可吗?
        EMSA或ChIP?我感觉不行吧。
        这些可能相对的说明转录因子结合能力变化了,但是结论很弱。不建议采用。

        荧光报告酶系统很敏感,我觉得可以试试。

        qRT试过了?

        WNT里面还有两个途径,你也需要注意。
        qRT是指real-time PCR吗?还没做,现在在订购试剂。您是不是觉得我应该先利用qRT发现beta-catenin有改变之后再定购topflash/fopflash的试剂盒?如果beta-catenin没有改变的话,就没有必要做检测TCF/LEF转录活性的检测了呢?

        我现在只想研究经典的Wnt-beta-catenin通路,对其他两个通路还不怎么了解。不知是否行得通?

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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