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cathy12303 有没有哪位前辈用过cAMP的ELISA试剂盒？dianaofyezi 我 有问题可以站内消息或者QQ52187644联系。白大褂2009 你好，我是新手，你用过的ELISA试剂在哪买的，哪个公司的比较好啊？还有，测定大鼠脑组织里的cAMP，放免法和ELISA法各有什么优缺点啊？谢谢回复！！songdianwei 我在 R&D公司买的，测细胞内的CAMP的含量，但是结果一直不理想。你可以给我发站内信，我们一起努力做好 ...

yys700714 请问如何用免疫沉淀法测PI3K活性呢？我查到相关文献，写得很清楚的，不过还是不太懂，不知需要准备什么试剂，需要什么仪器测定，TLC是什么啊，是不是需要荧光图像仪？很多疑问，请求做过的高手给予指点。多谢！！yhwangcams 建议可以使用Echelon的PI3-K ELISA试剂盒。http://www.echelon-inc.com/ccp1231-pi3-k-elisa-kit-k-1000.htm原理参见试剂盒 ...

lwjssry 求含有CRE重组酶序列的载体，有如下质粒可交换，或积分交换表达载体：pcDNA3.1(+)pcDNA3.1/GSpcDNA4HisMax BpIRES2-EGFPpAAV-IRES-hrGFPpBudCE4.1pEGFP-C1pEGFP-N1pCMV-DsRed腺病毒载体pADeasy-1,pShuttle，包括菌种BJ5183报告基因载体PGL3-BasicPGL3-Promotorstratagene公司 ...

haohuaiyong 大家好啊，我现在想用AG490处理细胞，干扰JAK-STAT3信号通路，查了相关文献，有的给药10Um,但是不知道（呵呵，我比较菜），是10um/ml还是10um/L，还请战友帮忙解答一下。付文献截图xdb86 人家的m是大写的M，M就是mol/L，10uM就是10×10-6mol/L。uM已经是一个浓度单位了，所以没有你说的：是10um/ml还是10um/L。haohuaiyong 谢谢版主啦，10×10-6m ...

月朗渔 我的试验是要先感染动物，再从动物体内取出待检测的细胞，测定细胞的凋亡。我现在做的有吉姆萨染色观察细胞形态、上流式检测早期和晚期细胞凋亡率。正准备做的有电镜观察细胞亚单位形态变化，caspase-9、caspase-3和细胞色素C释放的检测。因为我做的是线粒体途径的凋亡，所以选了这些指标，不知道是否合适？如果要排除死亡受体途径不知道还要检测哪些指标？还请各位高手指点一二。月朗渔 怎么没人回啊？还请做过凋亡检测的朋友 ...

l20 1 要是我想做某一个组织的正常细胞/肿瘤细胞，我怎么查找/去哪里查找现在都有哪些细胞系，怎样可以买到这些细胞系...要是有个细胞系查阅库就好了...2 怎样知道各种实验动物的特点：比如我要种瘤，在什么小鼠上能长，要多就能长出来...也有实验动物特点一览表之类的么....亲们谁能回答一下~~~谢谢了！！！colindream5 第一个问题答案：多看看有关你所研究的肿瘤细胞的论文，看看他们的细胞出自哪里，有的论文上提得不是很清楚的，你可以 ...

bigqi 我正在做一个蛋白的研究，多篇文章提到它可以作用于NRG，有NRG 1，有NRG beta 1.我搞不清楚到底beta 1属于那种NRG。我查了综述，是将NRG分为1、2、3、4的，没有找到NRG beta，请问beta＝2吗？还是beta 1＝1 beta？感觉都不太像。当然也可能是看的太快，又是英文的综述，漏掉了作者的解释。NRG不是我要研究的内容，不想花更多时间了，请问能否有人可以帮我，我就想知道我的蛋白可以作用于几个NRG。bigqi ...

yangcroom 请问大家，用western检测肿瘤细胞的 nf-kb p65表达时用的转膜条件是什么？多少V多少分钟？一抗二抗孵多久？我用的是中杉分装的nf-kb p65的抗体。还要注意些什么？yangcroom 顶一下！shichong 100v2h,一抗4°过夜，二抗1hyangcroom 谢谢 shichong ，我准备提总蛋白做的NF-KB，这样能做出来吗？同学转膜用15V30min做MMP-9也做出来了的，请问下转膜的条件和抗体有关吗？ ...

xk010882521 Interleukin 15: a proinflammatory role in rheumatoid arthritis synovitis！希望有好心人能帮忙！谢谢！happycoco 我下载到了这篇文章，给我你的联系方式xk010882521 哦！邮箱：kun_ling@126.com 谢谢哈xk010882521 已经收到！非常感谢！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的 ...

xueer1108 各位老师好：想请教一下：IL-1、IL-6等这些炎性因子介导的JAK/STAT通路中，在核内stat作用的靶基因有哪些？有IL-10吗？十分谢谢！nickandjn 有Bcl-XL，Cyclin D1，p21WAF1/CIP1,c-Myc等，不过不知道有没有IL-10.zfyyzz00 IL-10是STAT的靶基因。文献见Novakova Z,ect.Cytokine expression and signaling in drug-ind ...

river33617 大家好，学生我最近做悬浮细胞的转染。转染入对照质粒的细胞生长正常，但表达目的基因的细胞渐渐成团生长。初步考虑是该目的基因激活了黏附因子的表达，请问高手们这些黏附因子有哪些啊？ 如果能提供一两篇综述就更感激了。谢谢。river33617 顶一个，继续求助，谢谢了。jing3324 做个芯片去GO分析，这样还能有很多意外收获。lwjssry 这个课题非常有意思啊river33617 lwjssry wrote:这个课题非 ...

g_zxlin 最近做NF-kB免疫荧光，做出来对照老是核区也着色，没有明显的空核，不知是怎么回事，请各位大虾指导指导：第一二张图是正常对照细胞：g_zxlin 这一张也是对照：g_zxlin 这一张是LPS刺激后的巨噬细胞：g_zxlin LPS刺激：zfyyzz00 由于NF－kb采用免疫荧光检测可能会出现非特异性结合，一般转核观察NF-kb采用荧光效果欠佳，建议是否考虑采用激光共聚焦检测，其效果要比前者好多了。供参考。本文由丁香园 ...

zhanghaopeng 有几个问题想在此请教。1.在做免疫组化和Western时，观察ERK分子的变化是不是要先测定总ERK，而后在分别测定pERK1/2呢？可否推荐一款可以做组化和Western的一抗（我做的是小鼠）。2.关于Notch通路的研究如果受到条件、经费的限制是否可以单纯观测NICD的表达，以证明Notch的活化？3.看到Notch通路的阻断剂有很多，例如DAPT、LY411575等等，可否推荐一下哪款 ...

haohuaiyong 各位战友，最近我在做磷酸化STAT3的检测，用cell signaling公司的磷酸化检测抗体与总STAT3抗体做WB，实验组（bFGF+EGF）与阳性对照的磷酸化水平是有增加的，但总STAT3在实验组是减少的而在对照组是强表达的，我看别人的文献都是将总STAT3作为阳性内参一样，应该是不变化的啊，为什么我做了好多次都是不均一的啊？实在是搞不明白，请做过这方面的战友帮忙!谢谢！dzhzh 你的灌注胶 ...

zw051202109 请问检测细胞内磷酸二脂酶（PDE）的方法谢谢各位战友mikal2008 化学发光法.zcxd116 内标法。可以测本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

三天两夜 弱弱的问：G蛋白信号转导通路上的pka 和Camp怎么定量？谢谢了joanwhite 我知道camp可以用酶免，放免。pka不太清楚。dianaofyezi 我觉得用相对定量来说还是准确点，因为机体总是存在这些物质的，调控之后使之减少或者增加，所以认为相对定量来说更加准确些。如二楼所说，这两种方法都可以。三天两夜 谢谢，查了有关文献，放免是比较不错的方法pka的测定不是很详细，还是不怎么懂谢谢楼上两位，继续求问pka的问 ...

潭深水静 请教各位园友：新买的 anisomycin用什么溶液溶解保存。谢谢！潭深水静 主要用来刺激p-38，有用生理盐水稀释到终浓度的但不知道用什么来溶解配母液yhwangcams 根据sigma的说明，可以用多种溶液配制母液：solubility ethanol: 12 mg/mLsolubility H2O: 2 mg/mL Aqueous solutions are stable over a wide range of pH at room temperature.solubility DMS ...

lxzhjiang 查了很久都没有查到在衰老组织中，P53表达在什么位置，哪位大侠帮帮忙！happytears 应该跟正常组织相同，只是ｐ５３功能或胞核定位发生改变lxzhjiang 哦！谢谢！其他大侠还有没有好的建议？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

skybjp123 现在我要做一种药物对培养细胞的影响，观察这种药物是通过影响何种转录因子起作用的，如何设计一个实验呢？不知道这样设计行不行？加药组和未加药组进行对比，所反应的指标用PCR测定其含量，发现加药组和未加药组有明显的区别，然后使用Wstern blot 方法测定两组的相关的转录因子表达的区别，来证明是这个药物是通过这些转录因子起了作用，不知道这样的实验是否科学？另外这些转录因子在之前的文章中已经证明可以调控 ...

skybjp123 各位大哥大嫂，小弟最近在找寻 cathepsin K B L S 的相关转录因子，不知道有哪些呀？哪位牛人可否赐教，谢谢啦～～还有就是sp1是什么？兔子的sp1的基因序列怎么查不到啊？也请赐教～～谢谢～～skybjp123 另外还有就是：转录因子是怎么测定含量的？用荧光定量PCR技术可以吗？可信吗？happytears 1、转录因子可以先用相关软件预测，如TFbind TFsearch TFfact2、Sp1转录因子是参与真核细胞转录的高 ...