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leng724 如题：相应的人工合成物或mimics选择哪个作为发挥miRNA作用去转染比较好，这两个有什么区别。谢谢各位~~霍一刀hxs 现在做转染一般选择用mimics，即模拟剂。这个问题真没想过，估计人工合成物不能代表细胞中真正miRNA的表达情况吧。吴佰霖 人工合成物即文献mimics，序列应该与相应miRNA一致maomao030119 我觉的人工合成物与mimics应该都与目的基因序列一致吧dearest626 我 ...

wu_g_f 例如结肠癌细胞系，有非常之多，他们之间的各自特性是什么？有没有这方面的专门资料，能不能分享一下？侠骨仁医 其实很多肿瘤只是一个统称，我个人认为严格上说应该是一类疾病，而不是一种疾病，比如结肠癌按照组织起源主要为腺癌，其余还有粘液腺癌及未分化癌，那么就会有相应的细胞株，生物学特征也肯定不一样；再比如血液系统肿瘤还牵涉到染色体和融合基因的问题，即使是同样的组织起源，但是具有不一样的染色体改变或者融合基因，那么生 ...

yinfengzhizi 我需要做QRT-PCR，想用U6做内参，研究的标本时牛，可是我在NCBI的nucleartide上一搜，发现一下子出现好多，长度和序列也不同，不知道该选用哪一个。是查的方法不对么？还是需要再做些什么工作？望高手指点！zhujoker 你需要选择一下物种，要不的话你就看不清到底是什么了yinfengzhizi 我查的是牛的，用了cattle U6 snRNA,出来9个结果，长度不同，且用软件分析同源性，只有一 ...

普通学生 再来一个话题，如果要研究一个已知分子的分子伴侣或者伙伴基因，除了较为常用的酵母双杂交和免疫共沉淀，还有什么其他的办法，希望大家提供一点思路。此外请教一下分子伴侣（molecular chaperone）和伙伴基因（partner molecular or gene）是一个概念吗？如果不是有什么区别吗？多谢！zhujoker 分子伴侣是细胞中一大类蛋白质, 是由不相关的蛋白质组成的一个家系，它们介导其它蛋白质的正确装配，但自己不成 ...

imnini 各位专家，有谁能比较详细的讲解一下影响细胞增殖和迁移的细胞内信号通路？dream82 STAT3介导的信号通路对细胞增殖和迁移都有重要的意义。当然还有很多通路调节细胞增殖和迁移。我主要做STAT3 signaling，所以比较了解。stat3为正常细胞增殖所必须，STAT3敲除的老鼠是胚胎致死的。而绝大多数肿瘤细胞中STAT3都是持续激活的，持续激活的STAt3转录激活下游许多与增殖有关的target ge ...

sunk33 各位有没有听说过在丙酮丁醇梭菌中有一种能够响应丁醇的启动子，就是在丁醇存在的情况下能够启动该启动子下游基因的转录谢谢zhujoker 其实你题目就是说的错的，哪有什么丁醇特异性启动子？而是你想问的是丁醇能激活什么样的特异性启动子，像这种实验你可以考虑做双向，在用不用丁醇处理的情况下看蛋白的表达情况，然后筛选。sunk33 谢谢版主指导可能说法上不严谨我想问得是在目前关于丙酮丁醇梭菌的研究中 是否存在某一个 ...

普通学生 最近在做一个膜分子及其配体的相互作用，下一步想研究其激活后下游的信号转导途径，不知道大概的思路和具体的方法是什么啊？利用基因芯片和蛋白芯片吗？还是有什么其他的方法？希望大家提供一点想法，先多谢大家了啊！这个问题在其他版也求助过，但是不太积极，希望在这个版能够得到一个大概的思路和方法。freecell 这类命题，JBC上每年文章甚多。采取何种研究思路，我认为1、首先关键要整理文献，以前此类有无研究此类配体与其受 ...

unicornshi 谁会看预测与基因调控相关miRNA分子的表，文献说根据评分结果，我看不懂怎么按评分看，谢谢大家了：）unicornshi 结果做出来了，我该选择几个相关的microRNA啊unicornshi 谢谢版主，帮我解答一下好么，谢谢拉：）minicenter 看起来与target scan里面的图类似，如果是target scan，评分的负值越大越好，自由能越高越好，由此看来，推荐楼主首选miR-145，其次是miR-42 ...

霍一刀hxs miRNA靶基因相关预测网站中经常出现“7mer-m8”，其中“mer”表示什么意思？多谢高手指教。freecell The "-mer" suffix refers to the number of bases (monomer, 7-mer, oligomer, polymer...).霍一刀hxs 多谢版主freecell的指教，多谢。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixio ...

jinmingzhu1984 我做的过敏性鼻炎小鼠模型，鼻粘膜取后一直放在-80度中，但至少半个月前被人误拿出而未收好，即在室温中放置了至少半个月:(请教各位高手，这些标本是否还能进行real time PCR、western blot。本人半年多的心血，舍不得放弃。谢谢大家的宝贵意见，同时祝您新年快乐，万事顺心！zy1001 genomic PCR should be more or less ok ; qRT-PCR couold be problematic.Western b ...

minicenter 已知一个microRNA，可以在ucsc上查找已知的TF结合位点，也可预测其潜在的TF结合位点。反过来，已知一个TF，如NFAT，怎样预测它可以调控哪些microRNA的表达？在此求助各位高手解答，多谢！minicenter 我不小心发了两个帖子，在生物信息学里面发的那个似乎人气稍多一点儿http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=73&id=16632525&sty=1&tpg= ...

biophysics 搜了一下论坛，未果，我想问一下，使用荧光素酶如何检测某基因为miRNA的靶基因？大概是什么样的步骤呢？才接触，也不了解xuezhishui http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=16590646&sty=1&tpg=1&age=0biophysics 谢谢！您发的帖子我看到了，您的意思是现在常用的方法就是您帖子上写的吗？我看有的文献说看转了片段的荧光素酶载体的活性，如 ...

PCR352 本人想寻找一个糖蛋白的受体，这个糖蛋白由另个亚基（A和B )组成。但是目前没有这个糖蛋白的产品，只有A亚基原核表达产品，请问可以用这个亚基进行寻找受体吗？freecell 理论上可以。可以考虑用IP和PULL-DOWN找出共同结合的蛋白；随后将A的抗体封闭A，然后进一步分析。PCR352 谢谢，我再考虑一下，实在不行就得做真核表达产物了。dnazyme 这个蛋白的受体作用位点万一是与B亚基其作用呢？其作用的部位到底是 ...

cypress1975 最近有个实验要做，但是不知道用哪种方法较好。实验目的：检测80个已知其序列的基因在肺癌细胞系的肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中的表达差异。用哪种方法比较可靠，而且省钱，大约需要多少经费和时间。下面这些方法那些可以用？有没有其他方法？1. 基因表达指纹（ gene expression fingerprinting， gEF.2．基因表达系统分析（ serial analysis of gene expression， sAGE）.3. cDNA3′端 ...

rongshenghao 加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度问：1.Fura-2和Fluo-3区别？2.测量的是游离钙还是总钙呀？3.还有什么需要注意的？谢了！2010tiger Fura-2采用双波长检测，Fluo-3是单波长检测，Fura-2的激发波长是340nm和380nm，发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm，最大发射波长为526nm。Fura-2可以采用流式 ...

loyalty 如题。准备做有关肿瘤细胞信号转导机制的研究。疾病模型中A对B的作用。对象：人的肿瘤细胞系。思路：某处理因素作用下,A升高，检测B的升高。A knockdown， B无改变。A knockdown cell 转入携带有外源基因的表达载体，检测B升高。问题1： 因为没有查到与该研究相关的直接相关文献，无法参考，但是我认为信号转导途径的研究大致应该如此。然而，关于Knockdown的方法，如选择RNA干扰，操作方便。但是，在后面的步骤中 ...

cypress1975 克隆100个已知序列的基因于带有绿色荧光蛋白的载体中需要多少时间和经费？非常感谢gingivalis 方法：在NCBI中搜索下面的关键词，能在《methods in molecular biology》系列丛书中找到很多文章。high throughput cloning methods in molecular biology时间估计不会太长。关键花时间的是克隆以后的工作，表达，活性分析。钱，不知道，多多益善。版主freece ...

Cherrybei 请教各位高手，“ timing of cotranslational folding”该如何正确翻译？？谢谢！！！新年快乐！freecell 根据这个句子：We hypothesize that the presence of a rare codon, marked by the synonymous polymorphism, affects the timing of cotranslational folding and insertion of P-gp into the membrane, thereby alt ...

shaoyibo 请问大侠看篇文献说为检查一调控基因与被调控基因的MRNA水平及二者的关系，先做RT-PCR，后将上述基因重组质粒，最后荧光定量PCR分析，1、RT-PCR可能是用将基因钓出来用于构建质粒用的吗？2、重组后原核表达而不直接RT-PCR后进行表达分析是为什么？freecell 不知道是我老了，还是现在的语文都这么晦涩难懂，还是现在的研究生表述能力下降。我怎么看不懂你的问题呢？1、该文见于何处？ 何不写信给作者询问 ...

redsky 我想验证一个microRNA可以抑制某个基因，并且这个基因又反过来调控这个microRNA ，请问通过什么实验手段才能验证呢？bigbang_0_0 敲除？？？？bigbang_0_0 过表达？？？redsky 我想问一下大家，首先这种情况可能发生吗？buyqcn 这种调控机制属于反馈抑制或反馈激活回路/loop，非常常见。具体研究方法可以参考一下最经典的p53和mdm2反馈抑制回路，有很多这方面的文献。bigbang_0_0 re ...