【求助】看看我研究启动子的思路是否正确？
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① 证明A对B具有具有调控（上调）作用。
② 构建B全长及系列缺失载体，寻找顺式反应元件。
③ EMSA实验确定与顺式反应元件相结合的转录因子。
④ 若转录因子为已知蛋白，通过CHIP实验在体内验证转录因子与顺式反应元件相结合。
⑤ 通过RNA干扰与过表达转录因子进一步验证其对B表达的影响。(实验至此可结束)
⑥ 若转录因子为未知蛋白，上接步骤③，进行蛋白质谱分析、氨基酸测序、分子量分析等。
② 构建B全长及系列缺失载体，寻找顺式反应元件。
③ EMSA实验确定与顺式反应元件相结合的转录因子。
④ 若转录因子为已知蛋白，通过CHIP实验在体内验证转录因子与顺式反应元件相结合。
⑤ 通过RNA干扰与过表达转录因子进一步验证其对B表达的影响。(实验至此可结束)
⑥ 若转录因子为未知蛋白，上接步骤③，进行蛋白质谱分析、氨基酸测序、分子量分析等。
不错，挺合理的了
不过，要在预测方面要把握好一点，准确一些
不过，要在预测方面要把握好一点，准确一些
吴佰霖 wrote:
不错，挺合理的了
不过，要在预测方面要把握好一点，准确一些
谢谢回复，我的启动子2500bp，我没有做软件的预测，直接构建了5个缺失系列质粒，找出大致区域（500bp之内）；然后在此区域内在此构建缺失系列质粒，缩小范围，；最后构建突变质粒，精确定位。不知可行吗？
就是那么做的
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