【求助】看看我研究启动子的思路是否正确?
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① 证明A对B具有具有调控(上调)作用。
② 构建B全长及系列缺失载体,寻找顺式反应元件。
③ EMSA实验确定与顺式反应元件相结合的转录因子。
④ 若转录因子为已知蛋白,通过CHIP实验在体内验证转录因子与顺式反应元件相结合。
⑤ 通过RNA干扰与过表达转录因子进一步验证其对B表达的影响。(实验至此可结束)
⑥ 若转录因子为未知蛋白,上接步骤③,进行蛋白质谱分析、氨基酸测序、分子量分析等。
② 构建B全长及系列缺失载体,寻找顺式反应元件。
③ EMSA实验确定与顺式反应元件相结合的转录因子。
④ 若转录因子为已知蛋白,通过CHIP实验在体内验证转录因子与顺式反应元件相结合。
⑤ 通过RNA干扰与过表达转录因子进一步验证其对B表达的影响。(实验至此可结束)
⑥ 若转录因子为未知蛋白,上接步骤③,进行蛋白质谱分析、氨基酸测序、分子量分析等。
不错,挺合理的了
不过,要在预测方面要把握好一点,准确一些
不过,要在预测方面要把握好一点,准确一些
吴佰霖 wrote:
不错,挺合理的了
不过,要在预测方面要把握好一点,准确一些
谢谢回复,我的启动子2500bp,我没有做软件的预测,直接构建了5个缺失系列质粒,找出大致区域(500bp之内);然后在此区域内在此构建缺失系列质粒,缩小范围,;最后构建突变质粒,精确定位。不知可行吗?
就是那么做的
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