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gene122 本人遗传学准研究生，现在在实验室，看到有报告基因实验，但是不知道这个实验的原理及目的，哪位好心人解释下zhujoker 这个原理已经在这个版块讨论过了，自己学会搜索吧！下面链接有一些初步的介绍：http://www.biox.cn/content/20050411/10190.htm3090547 多多自己动手本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 ...

aning2599 运用生物信息学怎么反过来预测对某个基因的具有靶向调节作用的miRNA啊？zhujoker 其实你说的这块儿还是比较空白的。因为一般说来调节什么的表达是转录因子调控，但是由于miRNA很多位于基因间，所以很多调控无从研究。而很多位于内含子中的miRNA与其目的基因还不受同一启动子调控，所以对其研究还有一条很长的路要走。pianpianqiwu812 全基因组扫描是不是可以，现在不是挺热的吗?就是有点贵 ...

三叶虫 大家好，我最近准备做NF-κB信号通路中的P65，P50还有IKK，IκB。请问各位买哪个公司的抗体好，中衫的怎样？望各位多多指教。谢谢！！三叶虫 顶自己一下。。siru1234 你好，建议你买大品牌的抗体，质量有保证，我以前就曾用过abcom和sigma 的抗体，挺好用的。我们公司专门做血清的，如果你有需要可以联系，QQ：1137173658，电话：021-61729873，网址：www.biocando.cndianaofye ...

yy59410 在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用，我分别用p38,JNK,ERK相应的通路抑制剂阻断相应的通路后看给药后细胞的情况，发现这些通路的阻断并不能阻断药物对细胞的凋亡诱导，想请教坛子里的高手们这是怎么回事？我接下来需要做什么?希望大侠们赐教。不甚感激啊。chuckdouble yy59410 wrote:在下在做MAPK通路对皮肤成纤维细胞凋亡诱导的作用，我分别用p38,JNK,ERK相应的通 ...

baolingbaby 各位前辈，鄙人现NCBI菜鸟一个，现急需胰岛素基因序列以及它各个内含子和外显子的序列，如果能帮我附上图文解说的查询方法更感激不尽，我也尝试从头开始学NCBI但时间太紧了，我还得分析其他数据，各位拜托了，谢谢。我的邮箱是baolingbaby@163.com,结果太大的话可以发到我邮箱里。再次谢谢了yuandong 或许对你有用http://liucheng.name/1048/另外，摸索一下UCSC G ...

wangruimishu 哪位高手知道MTT实验如果用盐酸异丙醇溶解结晶的话，浓度该是多少呢？多谢赐教！！ylhuang0502 酸化异丙醇（0.1N HCL+无水异丙醇）详细步骤可参见：http://www.biotf.cn/read-htm-tid-221-page-e-fpage-1.htmlcyclin 很不错的东西wangruimishu 多谢 ylhuang0502本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

临窗听雪 最近想做microRNA的microarray, 筛选一下细胞经过treatment之后microRNA的表达变化，请问有做过这个的战友吗？这种方法的可靠性怎样？另外哪家公司的比较好？灰常感谢！yanglong ABI的taqman探针 嘿嘿pianpianqiwu812 一定要找一家大公司，而且实现说好后期数据分析的事，要不虽然做了不给做数据分析，相当于只完成三分之一，原始数据没有什么很大的意义，做芯片数据分析最重要 ...

liubodoctor 各位信号转导版的老师，牛人，大家好，提前祝大家端午快乐！学生有个问题咨询下大家，我是研一的肝胆外科的研究生，这段时间设计课题，也看了一些文献，实验室的老师建议做做肝癌的WNT通路方面的。WNT激活能够引起相关的MMP cyclinD cd44 VEGF等等相关的细胞增殖和转移的促进。我想的是设计实验阻断wnt通路，以求降低beta-catenin的水平和入核内激活相关癌基因的转录水平。然后检测胞内的磷 ...

barin 前期的石蜡IHC结果发现某某基因在指定类型肿瘤中是高表达的。请问用什么指标、方法检测该基因在指定肿瘤细胞株凋亡和增值好呢？barin 看来只好留着自己解决了。ylhuang0502 1. flow cytometry or other techniques to detect apoptosis2. MTT assay for cell proliferationgood luck!barin 谢谢楼上的。chuckdouble barin wrote:前期的石蜡IHC结 ...

naturewm 我是刚刚开始要做microRNA，所以很多东西都不是很熟悉，希望大家能够多帮忙。我现在想要克隆一个基因的3’UTR序列到含有luciferase报告基因的载体上，3‘UTR应该是在紧邻ORF下游与polyA tail之间的序列吧，但是这样的话整个3’UTR的长度就有大概1600bp了，是不是太长了，应该选择哪一段比较好？谢谢大家不吝赐教！希望以后能和大家有更多的交流！zhujoker 1600bp不长，可 ...

polo6892 请问哪个实验室的同学或是老师有Notch1质粒，有点朋友请和我联系下好吗？有事情咨询！多谢！我的EMAIL ：zhouwei5352877@163.com,QQ 286358161,我是武汉大学人民医院实验室的研究生！谢谢！liudaifu1997 我也感兴趣，等qinvicky 我们实验室做基因转染的，一直用N2质粒，不过我懂得不是很多~不知能否帮得上你kevinddd 我也需要啊！polo5352877 谢谢，你能把你 ...

woowe97417 要转一个带氯霉素抗性的质粒到DH5α保存，但是发现用的DH5α对氯霉素不敏感，氯霉素是用无水乙醇配的，有做过类似实验的站友帮忙解答一下，谢谢啦！gingivalis 严谨型质粒 25 ug/ml松弛性质粒 170 ug/ml《现代分子生物学实验技术》--P753 (卢圣栋)DH5α应该对氯霉素敏感，如果在上述两个浓度条件下，DH5α能生长，那就是DH5α出问题了，高压灭菌后扔掉，换新的重做。woowe97417 谢谢楼上的， ...

light666 干了若干年临床刚开始做实验，一些弄不明白的问题，请坛内高人指点一些：①做血液来源miRNA，qRT-PCR的内参到底用哪个比较好？文章里有U6、miR-16等，但有的文章互相有点矛盾。②我的血清样品很少，每个都不到1ml。选择stem-loop逆转录好，还是poly(A)好？问了几个朋友，有的说stem-loop省RNA样品，有的说poly(A)省RNA，到底哪一个更节省一些？我如果poly(A)的方法逆转录， ...

shuaierhu 大家好，最近在做悬浮细胞的实验，要观察药物对细胞的杀伤作用，想请问各位高手，除了mtt，台盼兰染色外，还有没有别的方法呢？barin 我想流式是可以的吧？shuaierhu 我们这里流式坏了，现在准备用hoechst试试，谢谢楼上啊！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

qianxubo 今日在阅读文献时见到了“allele specific expression (ASE) assay”，翻译成中文是否应该是“等位基因表达试验”？我以前从来没见过这种试验，请教高手以下问题：1、这种检验方法的由来？2、检验的机理是什么？3、这种检验方法的主要用途？还有，这段话中Conclusion: By using the largest cohorts analysed to date, as well as a standardized phenotype defini ...

zgq8888 求助：我想做一个QPCR检测肝癌组织及正常组织的一个基因表达，我是用哪个做标准品建立标准曲线；另外关于人的内参NAPDH的引物序列，不同文献不同，我应该怎样选择。谢谢zjubell 你要做绝对定量还是相对定量？既然你提取用内参，那应该就是相对定量了所以不需要标准品做标准曲线。但你需要对你的两对引物进行扩增效率测试也是10倍稀释，就拿cDNA即可。如果两个梯度间的Ct值差异刚好是3.326,就非常好了，达 ...

redsky 文献已经很多报道说某一miRNA在某一组织表达特异，但大多数miRNA不只在一个组织中表达，多数是在多个组织表达，而文献也将其表述为特异性表达miRNA，这个组织特异性miRNA如何鉴定的，可以根据某一miRNA在所有组织中的表达量平均值来定吗？如果高于这个平均值就是特异的？light666 我也有这样的疑问freecell Refer to this paper,or write to the author.Identifica ...

肝肝的发光鞋 目前在用慢病毒包装系统构建稳定高表达miRNA的细胞株，质粒是公司构建的，表达的是pre-miRNA。有一个问题，这个pre-miRNA能剪切成3p和5p两种成熟体，我体外瞬时转染做的是3p的功能，现在我转pre-miRNA进细胞后，我如何知道其发挥的功能是哪种成熟体的作用呢？或者，我想体内实验验证miR-3p的功能，用带pre-miRNA构建稳定细胞株，可以吗？求教高人。zmzpxsz 同问，帮顶下！zhuj ...

lyc_urology 本人，研一，要转染miRNA inhibitor,请教前辈:1、转染细胞一般inhibitor多少浓度？50nM?25nM?2、而且本人转然后，需要做MTT，WESTERN等实验，这需要考虑转染效率吗？怎么来判断转染效率呢?3、顺便问一下，抑制miRNA，就买个inhibitor和阴性对照就行了吧？还需要用阳性对照吗？4、转然后分别多久做MTT、Western、克隆形成实验以及流失细胞仪测细胞周期凋亡等？ ...

bowenwei P53蛋白可以用WESTERN BLOT法测定吗lnzyxyqy2003 可以啊fangweibin119 当然可以这个蛋白还是很好做的哦jgl2008 请教版主，这个p53蛋白在hela细胞中的检测如何，我做了好久，均未见条带，可否赐教下呢，感谢！忧兴逸亡 看下P53存在于细胞那个部位，是不是你没提取出来jgl2008 p53是核蛋白，我用的是单去污裂解液提的是总蛋白，以前检测过一次，出来啦的，但是条带很细，不知为何 ...