willion1985 miRNA功能动物实验方法willion1985 antagomir动物实验方案,做miRNA缺失性研究,大家觉得如何?freecell This paper plus its references are helpful for this study.http://www.nature.com/nmeth/journal/v6/n1/full/nmeth0109-37.htmlfunds 本实验室为上海高校科研室,现对外开放可代做miRNA ...
llj1985 图中,GAPDH基因箭头方向向左,而其他的基因有的箭头方向向右,或向左,请问这个箭头是什么意思?lmnsmu 这是Dundefined*段,DNA作为转录的模板具有不对称性,意思是DNA的两条链都可以作为mRNA的模板,但具体到特定的基因,它是有方向性的,只能以其中的一条链为模板。比如说GAPDH,箭头向右(5→3),意味上面的DNA单链是它的模板;而NOP2等箭头向左,表示它以上面DNA链的互补链作为模板。里子 学习了本文由 ...
一心向学hj 各位老师:想请教一下,我在做启动子转录活性方面的研究,做下来的结果是某一启动子位点的突变影响了它的转录活性,如果想继续研究下去,不知道还能从哪方面着手?有什么思路呢?谢谢各位了yuandong 多看文献,文献看到30篇了,你就会有不少想法了。一心向学hj 嗯,我也看了不少了!就是感觉没有什么好的思路!真是郁闷啊!LoftyMan 1. 该promoter有没有被什么protein结合,该promoter是否受该prot ...
wulingjie2008 (重复发贴,请版主见谅!)各位老师你们好!我是一名刚踏入研三的小硕,做了一年的基础实验,现在实验结果都出来了;但在分析时发现,所做的三个细胞因子中,有两个细胞因子的转录水平与其蛋白表达水平不一致;也就是说某组病人的细胞因子转录水平明显低于其他各组,且该转录水平与临床资料相关;但其蛋白表达水平却是高于其他组别,而与临床资料无相关性;对于这样的情况,我该如何解释实验结果?望请各位老师给予指点, ...
Burnell pBT载体多克隆位点酶切:见附件由于酶切位点离得近,用NotI 和 XhoI 是否能同时进行双酶切,还是需要分部酶切?另外,分别含 NotI和XhoI酶切位点的修饰引物一般需要几个保护碱基?Burnell 期待各位朋友为我答疑解惑,最近实验很郁闷,很悲剧!angler5156 不知道你用的什么公司的酶进行酶切的!这边有个网站是对酶切和保护碱基的设计的!比较有效!你参考下!http://www.neb.com/nebecomm/t ...
zhang201009 哪位高手能指点一下MAPK特异性抑制剂的使用方法?我培养的是海马神经元。:)谢谢谢谢shutaozheng_824 MAPK信号通路通常有3个主要的成员(ERK1/2, JNK1/2和p38),相应的抑制剂为U0126(还有一种PD98059,溶解性较差),SP600125和SB203580三种。使用的方法是先用DMSO先溶解成母液,然后在用无血清的细胞培养液稀释成工作液浓度。由于胎牛血清中还有较多的细 ...
xunyi09 各位师兄师姐,我准备做个干扰的实验,请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些?这个实验下来经费多少啊?刚入门,望多指教呀!!:)freecell 各有优缺点。经费据估计,最少10K。wst207 10k 啊 不算多willion1985 siRNA 简单方便clion007 xunyi09 wrote:各位师兄师姐,我准备做个干扰的实验,请问shRNA、siRNA和miRNA三者之间做干扰哪个更好些?这个实验下来 ...
myskite 同一张组织切片能同时做microRNA 原位杂交和某基因的原位杂交以及免疫组化吗?zhujoker 不行,一般使用连续切片来达到你的这种研究目的。myskite 哦,谢谢myskite microRNA探针用生物素标记还是荧光标记,还要做某基因的免疫组化myskite 做microRNA的原位杂交,公司说,地高辛比较常用,那么,如果我还要做目的基因的原位杂交,是不是,也要用地高辛标记啊?组化用荧光标记行吗?没做过原位 ...
lsdcfhyj 各位前辈,请问测定荧光素酶报告基因的荧光素酶活力需要用到哪些仪器及试剂盒?还有将含荧光素酶报告基因的质粒转染到癌细胞中建立稳定的细胞系,用哪种转染方法好些,建立稳定转染细胞系困难吗?大概几代后转染的基因会丢失?我查看了很多文献,但是不清楚具体的操作步骤及所需用到的仪器,希望做过这方面的前辈能给我指点一下,谢谢阳光海岛 荧光素酶的反应:Luciferin + ATP + ½02 ==(Luciferase)== Oxyluci ...
stillhorse 检测细胞的VEGF表达量,因为是分泌型蛋白,成熟体都分泌在胞外,大部分文献都是取细胞培养液上清做Elisa。如果实验要求不能检测上清液,可否用Elisa检测细胞内部的VEGF表达?胞内胞外的VEGF表达量是平行的,还是相对的?stillhorse 谢谢斑竹!那么是不是内部表达的VEGF高了,就说明细胞分泌在胞外的也高?二者的量是平行的吗?stillhorse 自己顶~~~期待做过胞内VEGF检测的高手 ...
hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒,邮寄过来的,拿到后,我该怎么办?多谢!freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的,将滤纸减碎,然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心,取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:sh ...
hxf_86 各位大侠,小弟请教一个问题哈~现在想寻求一方法,特异性的阻断细胞内一个蛋白(暂且叫这个蛋白叫B)的作用。以下是一些背景:1.蛋白B是从一个大蛋白(暂且叫作蛋白A)中水解下来的2.B从A中水解下来是自然现象,水解下来以后呢,A和B都有活性的3.现在想特异性的阻断B的活性,但是要求是不影响A的活性,所以不能用RNAi4.如果是用抗体的话,请问抗体能进入细胞核吗?谢谢各位大侠啦~hxf_86 哪位大侠能给予我帮助啊~有 ...
ahuchxq 最近做IkBa,用的santa cruze的抗体,过去用的抗体都特别号只有一条很特异性的条带,但是最近换了相同货号的另一个批次的抗体上面总是有一天很浓的非特异性条带,配的10%的胶,12%, 8%的,都是分的不开,也尝试过跑的时间久点,可是都分的不是很开,有时候偶尔会分的比较好,就是明显能看到时两条带,很烦人,而且还很浓。不知道该怎么办?请求高人指点指点!感激不尽!karoleaf actually you don't need to ...
mqjstudent 我现在需要测小鼠血液的胰岛素浓度,试剂盒给的标准样品单位为mIU/ml ,请问该如何换算?freecell 自己google一下 胰岛素换算,结果一堆。怎么这么懒呢,唉。http://blog.163.com/mxzhang81@126/blog/static/30062181200811521029937/limitless 能不能问下lz用的是哪个牌子的试剂盒tienam 园子里有,搜一下吧。本文由丁香园论坛提供, ...
yfsm 最近想买TUNNEL凋亡试剂盒,代理商分别给我推荐了Roche和Promega公司,以前没做过心理没辙,想请各位专家帮忙分析一下,非常感谢!xiaoluks 我想做TNNEL,罗氏的给你报价多少钱啊,楼主想买哪个货号的,如果好的话我也买一样的,呵呵,我也是没做过的,不过当时师姐有用DAB显色法做的,是用的罗氏的试剂盒,质量挺好的,不过我想用荧光的,楼主有什么意见?woxingwosu 我们用Roche,还可以。pro ...
buloubulou 本人前期试验发现内含子上某一SNP点与干扰素治疗疗效相关,想进一步做相关功能。虽然内含子上的SNP点不导致mRNA、蛋白水平的变化,但内含子并不是完全一点功能没有,比如调控作用什么的。该内含子SNP点的功能研究方向是什么?不知从哪下手, 请教各位大虾啦,急!!:~):~)freecell Refer to this paper:http://jcem.endojournals.org/cgi/content/full/90/5 ...
luoqq1985 想请问一下这里有没有哪位会用MC1061/P3这种感受态的?因为我之前常用的是Top10和DH-5a以及JCM109,最近要新做一个蛋白的表达质粒,提示要用MC1061/P3这个感受态。所以我想知道这个感受态与其他的有何不同?实验时需要注意什么?谢谢freecell 这个质粒来自何处?为何要用MC1601/P3这个感受态?luoqq1985 这个质粒是表达人的细胞核内的一个蛋白,不是我自己构建的,是别人 ...
willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏 ...
紫藤树 ΙΚΚε缺乏的小鼠肾小管上皮细胞可以买吗,在哪有?朋友们帮忙找一下,急用!!!!ylhuang0502 在ATCC上试试:atcc.orgfindlg atcc不是很会用啊,百度里面搜不出来吗本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号:shixiongcoming
细胞微管 请教老师,他指点说下一步应该做基因表达谱,这样才“心里有底”,好开展深入研究。但是我不明白,基因表达谱这类的组学研究在科研思路中,例如一个story从刚发现到完成loop的过程中,究竟处于什么样的地位?第二个问题,请教各位老师,基因表达谱的研究结果应该是哪些基因表达增加哪些降低吧?那么从这样的结果中进行信息分析、分类和建立进化树,这些对我来说比较抽象的概念又怎样提示下一步的研究方向呢?灰常感谢!细胞微管 抱歉,因 ...