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        【求助】始终不能得到可溶的蛋白表达

        丁香园论坛

        2496
        我正在克隆一个八百多bp的基因,换了很多载体,表达条件换了不少,可始终不能得到可溶的蛋白表达,哪位大师能够支招,可以提供一些表达条件,谢谢了
        可以尝试真核表达系统,例如杆状病毒系统或者毕赤酵母。
        先得确定连接转化都成功了吧,换一种裂解细胞的方法试试(溶剂),使你的蛋白溶解。
        版主freecell留言:
        您误解楼主的意思了。
        谢谢版主啦,不明白为什么包涵体始终不能通过变表达换条件来得到可溶的蛋白(原核表达),会不会有些蛋白疏水性很强,一表达就包裹在一起了,然后无法通过换条件表达得到可溶的蛋白的情况
        版主freecell留言:
        可以尝试更换其它载体。不要老是在一种载体上浪费时间。
        谢谢 不过已经换过很多载体了 还是得不到可溶的表达
        低温诱导==16摄氏度
        换菌株?不要用单纯的BL21(DE3)==貌似有些菌株有助于可溶性表达,具体名字不记得了。
        减少诱导的时间?

        实在不行,就真核表达吧。。。肿瘤细胞系转染之类。

        good luck!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】始终不能得到可溶的蛋白表达

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