全部

dxhly 我每次用PROMEGA胶回收试剂盒回收时，效率都很低是什么原因？我的目的片段为8.8kb左右，我大概加了6ug的DNA进行电泳，胶回收后最后用30ul elution Buffer 洗脱DNA时，浓度总数很低，一般在10ng/ul以内，影响后续实验，请各位高人指点，不胜感激！shylook promega的不应该这样差其实天根的就摇菌很好了割胶时尽量割小点严格按protocol操作xxzjcg 可以多加DNA上样，再割胶 ...

tongenjuan 本人对试验基本不通，刚要开始做试验，涉及到siRNA干扰技术，上网查了一下，可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达，在肿瘤细胞中做，是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好？我都要准备什么？shylook 干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了细胞只能用一次一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次要做后期实验比如干扰后一周要用细胞的话shRNA表达载 ...

wj2002yx 各位大侠好：本人最近做的是关于线粒体损伤相关的研究，用线粒体抽提试剂盒，抽提的线粒体，但是在提取的线粒体的纯度，以及是否是线粒体方面，急需要一个形体上的支持，但我们学校没有电镜设备。所以想用激光共聚焦显微镜，不知道是否能看到线粒体的形态，不知道给位前辈有没做过的，能不能给一个详细的protocol。谢谢了~~~wj2002yx 没有人关注的吗？？自己先顶顶~~~天乐盼盼 帮楼主顶一顶！dongweiguang 帮楼 ...

liyouqiang666 如上图所示，请问Dgrc8,再上标fl/fl，是什么意思呢？liyouqiang666 档住看不到了，我重发一个．丝路蓝缕 表示该基因被Cre锚定，该小鼠与表达Cre酶的转基因小鼠交配后可以得到该基因敲除小鼠本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小小学药者 请问各位大侠，我看说明书上说化学合成的siRNA 用DEPC水震荡溶解 有位师姐建议说类似于引物需4度过夜 这样才能溶解完全 但这样会不会使得siRNA降解呢？ 是否可加DEPC水溶解后立即用于转染呢？baby_susan 一般操作步骤是：1，拿到在公司合成的siRNA后，一般是干粉状得，先高速离心半分钟左右，目的是使在运输过程中飞到管壁上的粉末积聚到管底。2，然后根据实验浓度和公司提供的说明书加适量的DEPC水进行溶解，， ...

泡泡龙2005 最近想做siRNA，干扰效果的检测除了RT-PCR和WB以外，用流式检测可以吗？WB怕细胞不够用的，请教各位大虾！谢谢可以ibsbio 可以的！但是必须在RT-PCR，WB有一定效果基础上！biolinkphilic 主要是看你那个蛋白的表达是不是高表达的，如果不是高表达的话，用流式更难检测出来。因为流式缺乏一个信号放大的过程。华因康基因公司 为什么不做shRNA呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

laide 各位PCR高手：本人新手，想要用PCR的方法，用高保真的DNA聚合酶扩增一段长度为2700bp的DNA，用于基因克隆。但本人担心PCR后产物片段可能突变。由于没有做过，我想实验前预先评估一下整个实验的风险。故向各为有经验人士请教，用高保真的DNA聚合酶扩增，能否保证2700bpDNA不突变？还有哪些可行的措施可以保证整个PCR过程的保真性？欢迎各位高手赐教。济南基美 循环数不宜太多，突变在PCR中是积累的。 ...

cssc 如题，一个肿瘤患者，用他的肿瘤组织DNA和血液样本DNA测序时，两者所得的序列是否应该一致的？谢谢！bigbang_0_0 不是完全一致的，肿瘤细胞存在基因组不稳定的特点，易积累体细胞突变。而血液细胞多由造血干细胞分化得来，除非造血干细胞本身发生癌变，其基因组应该与胚胎时期的基因组是一致的。cssc 谢谢啊，感谢帮助！华因康基因公司 有些基因是是存在体细胞突变的，这些体细胞突变一般发生在肿瘤细胞中，所以肿瘤组织中突变比 ...

drink51 大家好，最近遇到一个很是头疼的问题。Feulgen染色法是什么东东？在网上搜了很多资料，但是解释都不是很好。今天突发奇想，到我们丁香园来求助，希望能够得到满意的答案。黄立坤 这是我在资源网站上http://goo.gl/9WJmO看到的，上传人是徐若雨，找了半天才解决你这个问题。Feulgen染色法：1924年建立，对DNA进行特异性染色基本原理：细胞中的DNA在60℃时用1mol/L HCI会解离脱氧核糖核酸，使 ...

otherwise http://azaleasays.com/2009/09/06/brief-history-of-microrna-research/从无人问津到淘金热–微RNA研究简史Posted onSeptember 6, 2009 by azalea今天师兄Charles推荐了2008年Lasker Basic Medical Research Award得主之一VictorAmbros的一篇文章:Ambros,V. (2008). The evolut ...

295546 如题。。。我看有些人说是断裂成200bp的片段，是否有人做过断裂时的长度特性？断裂点的偏好性？我很迷茫，如果是双链断裂 结构是怎么样的？是粘末端吗？多少碱基的粘末端？如果是单链断裂，有什么特性？还是两者都有？频率多少？大家如果可以，发点文献给我看一下，谢谢！yzbsmsz http://hi.baidu.com/namevirus/blog/item/a1e07905d5195462030881f6.htmlhttp://w ...

nytimes2008 最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是网上常说的E&K公司的96白板好像都没地方买的到。有没有人做过了的。求助下。 我用的是BioTek Synergy2 多功能微孔板检测仪来检测的。nytimes2008 没人知道吗。otherwise nytimes2008 wrote:最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是 ...

buding2008 最近做实验，想要个假基因，请问各位有没有做过它可以在什么 组织或者细胞上表达。大家畅所欲言，假基因到底表不表达，到底有没有功能。yuandong 有些有功能。waterbeijing 可能有功能，记得以前看过一篇文章说假基因的RNA跟可以编码的mRNA竞争miRNA本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

liuxinfanjian 提两个幼稚的问题：1、如果用hela细胞或者293细胞做工具细胞，做双荧光素酶的时候，3'-UTR端的扩增要以hela细胞或者293细胞的cDNA为模版呢还是以大鼠cDNA为模版呢？ 我我的我我的模型是大鼠的。2、mimics和inhibitor是不是只要大鼠和人的miRNA序列一致，就可以在人和大鼠之间通用呢？ zhujoker 、如果用hela细胞或者293细胞做工具细胞，做双荧光素 ...

fly6543210 各位大虾,向你们求救啦。心手上路，多多指点。我的实验室 一组对照组（不干预），一组实验组（干预），只养一种细胞。然后我要用miRNA 芯片检测。问题有如下：1. 每个芯片可以检测几个样本？ 实验组和对照组的样本检测是在同一张芯片上进行，还是分开在不同的芯片上进行？2. 实验组和对照组要最少重复做多少次芯片检测才能达到数据有统计分析意义？这样需要多少块芯片？3. 比如每块芯片可以测12个样本，那我的重复实验是不是可以在同一块芯 ...

chenlimei518 请教各位老师们：本人今天上午9：00做慢病毒转染肠癌贴壁细胞（SW620、HCT116），结果今晚6：00去换液观察一下细胞，其中有几个孔细胞死了很多，仅在孔边缘存活几个，有些孔细胞比较多。请老师们帮忙指导。谢谢！具体步骤如下：慢病毒包装：一、1D接293T细胞于6孔板中，undefined10 6/孔二、2D采用3质粒系统包装，12小时换液（1640+10%FBS）三、36小时收病毒，用0.22mm过滤，备用转染SW6 ...

木瓜奶茶 请问基因定点突变能一次性突变两个基因吗？我准备把GAC突变成CAG。还是得一个一个地突变？zhujoker 单个可以，一起也可以的木瓜奶茶 谢谢啊！ziyikeer 你是用试剂盒还是自己做啊？推荐一个试剂盒给你Easy Mutagenesis system。不过你要设计好引物，引物设计可以自己看说明书。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shix ...

chenguooo 各位大侠，小弟马上要做慢病毒尾静脉注射，想转染肝脏血管内皮细胞，想知道一只BALB/C小鼠要注射多少量？转染效率有多少？查不到类似的文献参考体内肝脏血管内皮好转吗？我的慢病毒滴度是undefined108TU/ML，来自上海英为信公司。谢谢！zhujoker 慢病毒滴度是undefined108TU/ML 打活体滴度太低，效果可能不会好chenguooo 我准备一只打300ul，那么一只就是1.undefined108TU，滴度再高的话，公司说滴度再高的 ...

liuchao8510 有没有人在细胞转染中应用加硫代硫酸修饰的胆固醇尾的miRNA inhibitor，加胆固醇文献中说是for delivery in vivo，硫代硫酸是为了stability，那在转染细胞的时候胆固醇会不会对转染效率造成影响，转染试剂用Lipofectamine RNAI MAX还是Lipofectamine 2000？有没有人比较过这种修饰的inhibitor与2-OMe修饰的inhibitor在细胞中对对应 ...

zhao5741321 谁能帮我解释一下 反义转录本是什么意思 ~谢谢小超123 可以百度搜一下！呵呵zhujoker 人的基因组的大量区域都被转录，其中绝大多数转录本涉及非编码RNA。有些基因组位点的正反两链都转录，形成顺式天然反义转录本对。也有两个转录本编码于基因组不同位点，但在序列上互补，形成反式天然反义转录本对。天然反义转录本对可以在转录、剪切、及翻译等多个层次起到调控作用。鼠标顺便提醒一下楼上的帅哥，都硕士博士了还什么 ...