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qisanni05 请问 做一种microRNA逆转录用哪家公司的试剂盒性价比较高？谢谢您的帮助！大鹏鸟 不知道你要做啥？RT-PCR？国内挺多的，不过广州复能基因的貌似挺全、挺专业的。http://www.fulengen.com/product/reagent/qpcr_detect.phpAll-in-One First-Strand cDNA Synthesis Kit采用RNase H活性缺失的莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV Rever ...

折翼的老鼠 各位大侠，我是一个新手。最近看NFκB通路，想知道测NFκB的mRNA表达量有意义么？还是IκBα的mRNA表达量可以代表NFkB的。希望不吝赐教！折翼的老鼠 丁香园里面的大虾们，咋都不见了呢。ronaldo_zj 楼主您好！对于NFκB通路以及您的问题，我有以下几点建议吧：1. 我不知道楼主您是单纯想看NFκB通路有没有激活还是NFκB的表达量的改变？两者其实还是有区别的，因为单纯的NFκB量的改变（无论是mRNA ...

sin_007 本人近日做TOPflash实验检测wnt通路的激活情况，遇到些许问题，希望做过TOPflash assay或了解wnt通路的战友解疑答惑。1、看了些相关文献，既有分别转染TOPflash和FOPflash，结果用TOP/FOP值来表示的；也有只转染TOPflash，然后就用TOP值来表示的。不知这是什么原因，在什么情况下不用FOP？ 我因为刚刚接触，用的是分别转染TOPflash和FOPflash，但遇到了 ...

bluesky0902 请教各位：为什么条带这么不清晰呢？而Marker还可以，是电泳的问题，胶的问题还是染色的问题呢？刚开始做，是在搞不明白~·电泳是非变性聚丙烯，染色步骤如下：染色步骤：1. 固定液：100%冰醋酸2ml，无水乙醇40ml加水至400ml，摇7-8min2. 银染液：0.6g硝酸银加水至300ml，摇12-15min3. 加水洗1-2次，每次1min4. 显色液：6g NaOH，4ml甲醛，1%硫代硫酸钠800ul，加水至400ml ...

glacierna6 如果是做western blot，有个电转的过程，蛋白可以和NC膜比较牢固的结合。但是如果我前面步骤都不做，直接点二抗到NC膜上呢，放置10分钟，能否牢固结合？如果加封闭液，用摇床晃或者不晃，会不会把二抗从膜上晃下来（假设是没有饱和结合的）？谢谢高人指点！shb-sangon 直接点二抗到NC膜上(膜下放置滤纸），放置10分钟，自然风干，能牢固结合。用无蛋白封闭液（PW040），用摇床轻晃，不会把二抗从膜上晃下 ...

xumin520jie 谁能帮我设计一下14-3-3η的全长引物。需要加上酶切位点正义链 XhoI CCG（保护碱基） CTC GAG反义链 Xba CTAG（保护碱基） TCT AGA14-3-3η的全长序列其中 Cds 176..9161 tgcagccagc tagcgagaag gcgcgagcgg cggcgcagcc agcagcctcc cgccagccgg61 cgagccagtg cgcgtgcgcg gcggcggcct cggcggcgac cgggaagcgg acgggc ...

wx275411643 本人是新手，现在做课题，想请教一下，什么叫tagSNPs、 HapMap SNPs、 untyped SNPs ？它们有什么地方不同吗？尤其是untyped SNPs。先谢谢各位学长学姐们帮助！biolinkphilic A tag SNP is a representative single nucleotide polymorphism (SNP) in a region of the genome with high linkage disequilibrium (the non-random ...

syzh1030 如题，看到一篇文章，讲Cux1蛋白的。其中讲到Cux家族成员有p200、p110、p75、p90，等，p200有三个cut重复域（CR）一个同源结构域（HD）,想请问下这个p多少到底怎么理解谢谢~woxingwosu 那是命名一个新蛋白的时候，就干脆用p代表protein，以及蛋白的分子量大小来命名，形象直观。liangjian9007 是，同意上面楼主说的mannitolzju 同二楼本文由丁香园论坛提供，想了解 ...

wx275411643 本人是新手，现在做课题，想请教一下，什么叫tagSNPs、 HapMap SNPs、 untyped SNPs ？它们有什么地方不同吗？尤其是untyped SNPs。先谢谢各位学长学姐们帮助！lide658 tag SNP 是指标签SNP，一般与其他的SNP相连锁，所以具有代表性的SNP。HapMap SNP 是指HapMap 数据库中的SNP，其包括tag SNP。untyped SNP? 我没有见过这个名词，但是按照我的理解是不是指对于这个SN ...

expolee 大家好，最近检测肿瘤markerA表达，qPCR和WT检测肿瘤细胞是高表达的，收集病人标本做成组织芯片后免疫组化检测则是：肿瘤组织弱表达、正常组织弱表达，怎么解释呢？尽管IHC只是定位，可弱表达的话有没有再往下做下去的意义了？欢迎大家发言，谢谢！shylook 组织标本保存问题IHC是否规范是否摸过抗体使用浓度 包括二抗一抗能能否做IHCexpolee 同时检测两个指标（一抗分别来自不同公司）IHC结果一个公 ...

wolfdance 我同事从植物提取物中获得了一个小分子化合物，已经证实这个化合物可以跟A受体结合从而引起相应的效应。我同事现在想知道该化合物在A受体的结合位点。估计要用到点突变技术，请问哪个实验室或者公司有类似的外包业务。价格大概多少。除此之外还可以采用什么方法。请各位专家不吝赐教！谢谢！laforet 自己买引物和Pfu酶就可以做点突变了，很简单的，只需要最基本的分子克隆知识。wolfdance laforet wrot ...

lixingliang1987 本人最近小提质粒，挑取单克隆于3毫升LB培养基培养6小时候抽质粒，发现浓度只有50纳克每微升。后来重新挑取单克隆于10毫升LB培养基培养14小时，收集10ml菌液进行离心，裂解，上柱（10ml菌液只上一个柱子，量绝对足够了吧），结果浓度才300纳克每微升，我本计划下步做转染，如此低得浓度我很是担心啊不知道大家有没有遇到过此情况。我用的是pEGFP-N2质粒，是高拷贝的。PS：我怀疑是不 ...

淡墨留痕 我们最近在培养ＨＣＴ１１６细胞，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢五月鱼 你好， 我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。tianyayangg ...

doctorchihlee 大家好，请问一下空白载体（含GFP,但不含靶基因）成功转染哺乳动物细胞后，荧光显微镜下观察GFP，观察到细胞全部呈绿色还是仅仅外周发光或是核发光？谢谢！doctorchihlee GFP在细胞质，是全部发光？！？real_madrid_146 这个是我用pEGFP-C2转HEK293的图。shylook 就是这样的济南基美 全部发光，GFP由于比较小，会有部分可以进入细胞核，有文献报道过本文由丁香园论坛提供， ...

lixingliang1987 本人近日构建克隆，送公司测序。得到序列结果进行DNAMAN分析，发现和目的基因相比多出两个碱基，我随后查看测序峰图，发现峰图上并没有相应的碱基，询问过公司后，他们建议按照峰图来分析结果。像这种拼接序列和峰图序列不同的现象，不知大家平时经常遇到吗？shylook 1.峰图有的 才能有 请确认是否真的没有多出俩碱基确认后打电话给公司 两边都打开峰图 确认一下如果确实没有 即声讨不负责任 不付款 找另外的公司再测2.真 ...

程程880309 求各位：我是研一学生，因课题组的研究方向是关于microRNA，请问用哪本书比较好？谢谢各位啦~~负极兔 友情帮顶smilewei15 马上读研，现在的毕设也是这个方向~~同求~~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

ww_e00 我要研究Akt、PTEN蛋白在接受处理因素后的变化情况。参考一些帖子和文章，看到：5min-120min用于研究受体传递放大信号；2h-48h用于研究细胞接受信号后出现细胞周期变化、出现特定生物行为等。于是我设计了几个时间点：15min, 30min, 60min, 2h, 4h, 8h, 16h, 应该足够研究细胞接受处理后出现的短期长期变化情况了吧？fungicider 既然你查文献中是到48小时，为什么你设计的最长是到16小时？ww_ ...

drmine 假设某基因的DNA序列是：5'-GAACT-3'3'-CTTGA-5'问题一： 对 该DNA进行体外转录，得到的RNA序列是什么？问题二： 该序列对应的mRNA序列是什么？假设mRNA序列是5'-GUUCU,问题一：由该mRNA反转录得到的cDNA序列是什么？问题二： 针对该mRNA的siRNA序列，sense strand是什么？谢谢。lifz2001 1.到的RNA是5'-AGUUC3'基因组DNA在转录后经过剪切和拼接得到mRNA。 ...

bjx2325 请教，有什么比较好的办法对甲基化含量进行测定么，谢谢！shylook 1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲基化片段bjx2325 shylook wrote:1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲 ...

0534130323 请求高手：实验中细胞受刺激之后一些相关细胞因子分泌增多，我用药物处理之后这些细胞因子分泌减少了。我往上追溯其作用机制，分别检测相关调控基因的蛋白表达和mRNA表达情况。结果发现药物只影响基因的蛋白表达，对其mRNA却没有影响。请问这该如何解释？霍一刀hxs 影响翻译而不影响转录，很正常的调控方式。0534130323 非常感谢whatisever 也可能只影响蛋白的稳定性。济南基美 降解被抑制了本文由丁香 ...