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tangc233 一直在养骨髓间充质干细胞，年前出现了一次细胞污染，年后我改用进口血清，同时每次配完液（低糖DMEM+10%血清+双抗）后都用滤器过滤一下，最近发现细胞不肯长，甚至之前都贴壁生长的细胞换完液后2天大半都不见了，但还可见一些贴壁细胞（换液前后的培养液配置都是一样的），现在我也不知道问题出在哪里，还请各位高手多多指教！宋丽娟1016 我想，你可以从以下几个方面考虑：1，是不是你的双抗浓度太高了呀2你的细胞是第几 ...

honbin 由于实验条件有限，现在用某厂商试剂盒提全血中的rna，在裂解细胞的时候需要在4度离心机中2100rpm离心10分钟。请问，4度离心的目的是什么？如果不在4度中离心，结果会出现怎样的偏差？请高手帮忙解答，谢谢。selleckchem01 低温离心主要是为了降低RNAse的活性，防止RNA被降解honbin selleckchem01 wrote:低温离心主要是为了降低RNAse的活性，防止RNA被降解好的。非常感谢 ...

batton 转入细胞的可见FAM标记的绿荧光，不过本人有一点搞不懂，可能有一些是没有转进细胞的，为什么细胞外就看不到荧光呢？吴佰霖 能不能这样理解，进入细胞后就具有了聚集的作用，分散在培养基中就不明显了ouyi2738 你好，我想问一下你每次转染后多长时间观察，还有用的miRNA mimic的量是多少啊，我稀释到20mM,每次转2ul，也就是200pM，可是在倒置荧光显微镜下观察到的荧光很弱@batton。谢谢！lvhen5 ...

泥小明 小弟刚开始入手生物实验，弱弱地问一下各个结肠癌细胞株有什么区别啊？实验时候该怎么确定用哪个细胞株？HT-29,SW480，SW620，Caco-2，T84，LoVo,LS174泥小明 怎么没有人？发错版块了吗？roy2929 选哪种也要根据实验的吧比如 检测下要研究的蛋白在哪种细胞系里水平最异常 或者某个表型最明显然后对这种细胞系展开进一步研究，应该会容易出结果。当然也要考虑细胞本身好不好养，转染方不方便，等等我也是新手，懂得 ...

夏天的雨滴 能不能用细胞学的方法去研究药物的抗炎机制呀，用哪种细胞作为模型细胞呢？？？急呀，请求高手相助xindiwuzhe 可以，能很快出结果的是原代的巨噬细胞，可以制备小鼠巨噬细胞，具体方法园子里很多，然后用LPS刺激，检测各种炎症指标就可以了。夏天的雨滴 谢谢啦，查到相关文献啦小哇and命运古道 你也是提之前打肉汤吗？？不打肉汤直接用LPS体外刺激巨噬细胞可以吗夏天的雨滴 我还没有着手做，现在是写实验方案阶段，不好意思小哇an ...

zasnaagua 检测细胞周期实验中，s期增多，说明该种处理是抑制细胞增殖还是促进细胞增殖？谢谢bigbang_0_0 当然是抑制，因为S期的主要任务是DNA复制，DNA复制本身就是细胞增殖的必要条件。但是仅仅通过细胞周期分布分析不足以证明细胞的增殖速率的改变，MTT或者cologenic assay才能提供直接的证据吴佰霖 个人认为是另外一种阻滞，建议做MTT验证zasnaagua 那请问做了MTT以后，发现该种处理确实使 ...

菊开那夜 向各位高手求助，A蛋白，被RNAi后，可以延长秀丽线虫寿命，它的这个作用部分依赖于DAF-16转录因子的调控，但研究证明，其对线虫寿命的影响还有部分不依赖DAF-16的调控，我希望能够寻找可能参与的其他信号通路，该如何设计实验？qing0831 可以同时制备一个针对A蛋白的RNAi干扰模型和过表达模型，然后用表达芯片分析哪些基因发生了明显的下调和上调，再根据这些基因寻找相关的信号通路。我曾做过类似的实验，如有 ...

医者为公 急急急求助：磷酸化和没有磷酸化的蛋白引物有没有差别？最近在做RT-PCR的前期准备，对引物不是很了解，想找磷酸化蛋白引物，但是在外文里面都只有非磷酸化的蛋白引物，想知道，他们之间是否有差别。谢谢！xxtlxx 磷酸化是蛋白水平的修饰，RT-PCR测的是RNA水平，是转录水平，概念都不是一个。bigbang_0_0 。。。。。。wenzonglu 蛋白怎么跟引物混到一块去啦？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

holybible1263 请问体外做hepG-2,体内做H22，有可比性吗？fuxiao29 我个人认为体外做hepG-2实验,体内也应该用同一种细胞系做，这样才有可比性。holybible1263 谢谢，不过HEPG-2没有办法做体内呀，体内要用什么呢？fuxiao29 可以做体内实验呀，你可以将你用的质粒转染到HEPG-2细胞系里，构建稳定细胞系，然后注入动物体内。xiayuxue 据说HepG2很难成瘤本文由丁香园论坛提供，想 ...

chuenshui 细胞株：LS 174T来源：中科院上海细胞库培养基 :DMEM 10%小牛血清问题：刚买回来时传代2次，都没问题。扩大培养时发现，细胞养起来时培养基发紫，0.25%胰酶消化传代，24小时候细胞50%不贴壁，细胞还呈发亮状态。尝试解决办法：更换培养基，10小时后培养基发紫，细胞依然呈漂浮状态。无解决现象。请问有什么办法可以解决，培养箱应该没问题，箱子里有同时培养的其他细胞，无异常现象。布布vs果果 细胞有抱团生长现象吗？s ...

lxx071217 目前在提取蛋白时出现了些问题，希望能得到大家的帮助。我用的是ripa裂解液，加了蛋白酶抑制剂，将贴壁细胞刮下来，冰上继续裂解，期间vortex几次，最后12,000gx10min ;此时分别取上清和沉淀加入loading buffer煮沸5min，上样做WB。发现上清和沉淀中均有目的条带。现想咨询：离心后的沉淀是什么成分？（细胞核？碎片？还是不溶性蛋白）；如果是不溶性的蛋白加了loading buffer煮沸就 ...

hhyy601 我是细胞生物的外行，我现在请教各问题，通过SMAD信号通路，是使samd2/3磷酸化还是使samd2/3表达上升？MIRNA下降是使samd2/3磷酸化还是表达上升，表达上升激活了这个通路吗？谢谢zfv2007 1. smad2/3是转录因子，受到上游通路激活后发生磷酸化，然后入核调控相应靶基因的转录，所以激活应该是smad2/3的磷酸化增加。2.在其他条件不变的情况下，smad2/3表达量增加的话，其激活也有可 ...

tongenjuan 我想要研究肿瘤细胞在药物及照射的情况下，其细胞的生长情况。考虑到一块板上不能同时做药物及照射，因为照射一部分孔时不能保证药物组不受射线影响；而且如果分为2块版的话，只能分别检测，结果比较就没有意义了。因此想询问一下除了MTT法，还有没有其他的方法可以检测到细胞生长抑制情况湘洋剑客 貌似必须两块板不用MTT，CCK8也行流式ELISA蛋白 还有就是用Invitrogen公司的CFSE细胞增殖流式检 ...

lion0001 本人想知道国内哪里可以买到，大约多少钱一只。非常感谢哪位大侠能够相告。waals 为啥不上jaxmice买呢，好多个strain呢lion0001 谢谢waals。但是，好像jax只在台湾有公司。在大陆能够向台湾订购吗？请指点。冰辉水笑雪 您们好，请教大家一个问题，jaxmice公司卖的是不是已经缺失好的，还是，还得自己通过交配构建敲除老鼠？比如，我要一种HIF1α基因敲除的老鼠，jaxmice公司查到的 B6.1 ...

wh861017 求助：我用了三个综合性miRNA靶基因预测软件：starBase、miRecords、TarBase预测miR-155和miR-30a的靶基因，怎么每个软件预测的靶基因个数不一样，而且有的已经被证实的靶基因缺不在预测的靶基因范围内，我该相信哪个软件？急！！！！！charllu 你可以在PICTAR、MIRBASE、DIANA-MICROT或者Targetscan上再看看，一般这几个网站是比较权威的预测软件， ...

小红赛 尤其是那个抑制符号扁箭头，怎么搞出来的，PPT上也没有追寻希冀 illustrator完全可以实现小红赛 追寻希冀 wrote:illustrator完全可以实现那个抑制符号 一横一竖 除了 illustrator，还有什么简单的办法可以画出追寻希冀 photoshop小红赛 追寻希冀 wrote:photoshop上面那个图的符号 不是photoshop画的吧？追寻希冀 photoshop可以画出你所说的“抑制符号”，但上图显然不是用phot ...

haofeng 无血清培养MDA-MB-468细胞24小时，细胞漂起来，细胞周围出现淡黑色半透明的圈；正常10%血清培养时也有，不知道各位高手，有没有人见过这种情况，有什么建议？hngwzhu 你的所谓的黑圈有没有增多的情况，如果有的话可能是酵母污染！如果没有考虑是不是细胞本身就污染所谓的黑胶虫。drcells 不像是传说中的黑胶虫污染。。。细胞系中这种“污染”比较普遍。特别是对相对生长周期比较长的细胞。和死细胞成正比。它们可大 ...

dscgu 迄今已发现了VEGF的三种酪氨酸蛋白激酶受体，分别是VEGFR-1（flt-1）、VEGFR-2（flk-1，也称KDR）、VEGFR-3（flt-4）。是否能选择性抑制VEGFR-1（flt-1）、VEGFR-2（flk-1，也称KDR）、freecell ZM323881, a VEGF receptor (Flk-1)-specific inhibitorhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17211450SU5 ...

xiehechen 求详细关于检测细胞周期的流式细胞技术步骤 谢谢各位xiayuxue 期待中！sdjlmu Procedures of DNA Flow Cytometry (Cell Cycle Analysis)? Cell pellet (2-5X105 cells/sample)? Resuspend and fix cells in cold citrate buffer for 5-10 min at 4℃to make the cell density 2X105 cells/200 ml citrate buffer. (May keep cel ...

hbsyliuyang rt 请不吝赐教 感谢！david_xmu 没什么太大的区别，另外内皮细胞在不同的培养基中培养可能会有形态上的区别hbsyliuyang 谢谢这位达人！ 拜本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming