• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】关于阴道鳞状细胞原代培养

        丁香园论坛

        1510
        各位老师好,最近在做阴道壁鳞状细胞的原代培养,一直不见起色,培养不成功,情况就是没有任何细胞长出来,特来请教大家。

        看了好多文献,看了很多细胞培养的资料,咨询过很多同学,然后做了多次,都是没有细胞,呵呵

        现在有这么几个问题:

        1:培养基的选择:
        文献中都说用的是K-SFM培养基,我现在是用了K-SFM培养基和DMEM/F12两种培养基同时做,希望对比一下两种培养基的情况。
        结果都是没长出来,DMEM/F12时,24小时候,培养瓶中会出现一种很细小的像细菌一样的小东西,但是培养液一直是清亮的,这些小东西经过染色不着色,而且随着时间延长而大量增多,有的一直漂在液中,有的会贴服培养瓶底部,冲洗不掉,不知道是什么东西?

        2:关于组织剪碎:
        由于我取的是阴道残端的一小块组织,但是肉眼没法仅将上皮层取下,故直接完全剪碎,直接铺板。
        可有人说应该剪得块大些,用镊子夹着组织块,让上皮层的面朝向培养瓶的底部,这个确实很难做到,因为组织本来就很小,稍做剪碎,我就分不清面了。。。
        还有人说直接剪得碎一些,直接铺板,理论上应该有一半的上皮层会朝向底部。。。。
        目前我采用的是第二种,不知是否不妥?

        3:关于培养瓶中的培养液:
        我一般加极少量培养液,4-6小时再加2ml培养液(75ml培养瓶),然后应该什么时候换液呢?
        最近我一般是每24小时换一次,换的时候发现就会把本已贴到瓶底的组织快给冲走,很是郁闷

        另外,当培养瓶放入培养箱后,在5%二氧化碳环境下,培养液的颜色应该是什么样的呢?
        应该是清亮且微黄的吗?
        我觉得我的培养液每次从培养箱中拿出来,都是微黄的,不知道这个是否正常?

        谢谢各位老师给于指点!
        做过小鼠的神经原代和上皮细胞的原代培养,我好奇的是,怎么没有消化这一步呢??毕竟是组织啊,直接剪碎能得到多少游离的单细胞啊?当然,最可靠的还是查文献,看看人家的protocol是怎样描述的,应该不是太难的
        原代培养有两种:一种是你说的酶消化法,另一个是组织爬片法,当然不用酶了,呵呵
        现在还有在养阴道上皮细胞吗?用K-sfm培养基可以养出来,我的问题是每次取标本都会污染,不知道你有没有这方面问题,怎么对标本消毒

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】关于阴道鳞状细胞原代培养

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序