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        酵母遗传学方法12:酵母菌落PCR方法

        互联网

        3106

         

        酵母菌落 PCR 方法

         

        1. 在冰上配制反应混合液:

        2 μ l                   10 ×菌落 PCR 缓冲液

        1.2 μ l                 25mmol/L MgCl2

        0.4 μ l                 10mmol/L dNTPs

        10pmol                引物(每一种引物)

        0.2 μ l                 Taq DNA 聚合酶( 5U

        加水到总体积为 20 μ l

        2. 用移液器加微量细胞(约 0.25 μ l )到 PCR 反应混合液中( 20 μ l 反应体积)

        3. PCR 循环参数:

        94           4 分钟

        94           1 分钟

        55            1 分钟

        72           2 分钟

        35 个循环

        72           10 分钟

        4. 上全部样品进行琼脂糖电泳。

         

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