PCR-RFLP实验中遇到的问题

我最近做酶切的实验，PCR的产物经电泳观察，结果很好，但是PCR产物再酶切的时候就遇到问题了~酶切的反应体系是20ul,分别是 9.5ul ddH2O,8ul PCR 产物，2ul Buffer,0.5ul 内切酶，内切酶买的是NEB的，根据说明37℃温育1h,但是试了一个位点的大概60个标本之后，没有一个能切下来的，后来怕温育的时间不够，就2h,4h,过夜的都试过，还是没有酶切条带，请各位前辈帮我分析下原因，或者我实验中有什么要改进的......再此谢过！