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        细胞免疫荧光步骤需要注意的问题?

        相关实验:细胞免疫荧光

        最新修订时间:

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        合作专家 | 宋倩硕士

        毒理学 贵州医科大学

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        审核专家 | 孔月硕士

        生理学 大连医科大学

        材料与仪器

        甲醛、 Triton-X100

        步骤

        (1)固定剂的选择:看实验蛋白在细胞哪个位置表达选择相应的固定剂,3.7%-4% 的甲醛或多聚甲醛是常用的固定剂,适用于绝大多数蛋白;

        (2)通透剂的选择:一般使用 0.1%-0.2% 的 Triton-X100,而选择甲醇固定一般无需再通透,若蛋白不在细胞膜上表达则不需要通透处理;

        (3)细胞铺板的密度要合适,不要太密(镜下细胞一个连一个不行),也不要太稀(镜下有屈指可数的细胞不行),细胞密度以达到 75%-85% 为佳;

        (4)二抗孵育及后面的操作步骤注意避光;

        (5)洗涤动作要轻柔,每次洗涤时间为 5 min 左右。

        来源:丁香实验

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