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        FITC标记抗体-改良法

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        2962
              试剂:
              1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g 溶于2000ml三蒸水中,调整pH至7.2;
              2. 0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml 加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中,充分混合后,调整pH至9.0;
              3. 3%中碳酸钠水溶液的配制。称取1.5g无水正碳酸钠充分溶解于50ml三蒸水中即成;

              方法与步骤:
              根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清,分离球蛋白。
              1. 用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg,缓冲液为总量的10%;
              2. 将以上溶液降温至4℃,按蛋白:荧光素=50—80mg:1mg的比例加入异硫氰酸荧光素,在0—4℃下电磁搅拌12—14h;
              3.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白沉淀分离,除去未结合的荧光素,再用缓冲盐水透析,除去硫酸铵,最后用Nessler氏试剂测验至隔夜透析之盐水无氨离子及荧光色素为止;
              4.将制备好的荧光抗体加0.01%的叠氮钠,分装在1ml安培中,或冻干,或保存于4℃冰箱中可以用半年以上,也可于-20℃冰箱保存达2年以上。
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