• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        FITC标记抗体-Marsshall氏法

        互联网

        2054
              材料:
              抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等。
         
              方法与步骤:
              1. 抗体的准备。量取适量已知浓度的球蛋白溶液,置入三角烧瓶中,加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最终球蛋白浓度为20mg/ml,缓冲液容量为总量的1/10,混匀,将三角烧瓶置冰槽中,电磁搅拌速度适当,即以不起泡沫为宜搅拌5—10min;
              2. 荧光素的准备。根据欲标记的蛋白质总量,按每毫克蛋白加0.01mg荧光素的比例,用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末;
              3. 结合(或称标记)。将称取的荧光色素缓慢加入到球蛋白溶液中,并不停地搅拌,避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻璃棒上,在大约5—10min内加完。然后继续搅拌12—18h。因荧光素与球蛋白结合期间要求必须保持蛋白溶液于4℃左右,所以需要即使地添冰或去水。亦可将结合装置安放在4℃冰箱或冰库中;
              4. 透析。荧光素与球蛋白结合完毕后,将球蛋白的溶液以2500r/min离心20min,除去其中少量的沉淀物后,装入透析袋中再置于烧杯中,在0—4℃下用pH8.0的缓冲盐溶液透析过夜;
              5. 过柱。取透析过夜的标记物,过葡萄糖凝胶G-25或G-50柱,分离出游离荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序