• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        为滤泡辅助性T细胞流式细胞分析染色

        互联网

        4736
        一、材料和试剂

        1. 抗体

        (1)Ratanti-mouseCXCR5-biotin(BP Pharmingen 551960)

        (2)Goatanti-ratIgG-biotin(BP Pharmingen 554014)

        (3)Straptavidin-PECy7(B PPharmingen 557598)

        (4)Ratanti-mouseB220-pacificblue450(eBioscience 48-0452-82)

        (5)Ratanti-mouseCD11b-pacificblue450(eBioscience 48-0112-82)

        (6)Ratanti-mouseCD4-APCeFluor780(eBioscience 47-0042-82)

        (7)Hamsteranti-mousePD-1-PE(eBioscience 12-9985-82)

        (8)MouseFcblock(BD Pharmingen 553141)

        2. 其它材料:

        (1)FACSbuffer:3%胎牛血清in PBS

        (2)Dulbecco’sModificationEagleMedium(DMEM,Invitrogen)

        (3)氯化铵(0.17M,pH7.4,过滤灭菌)

        (4)锥形管(BD Labware)

        (5)吲哚核酸染色(Invitrogen)

        二、仪器

        1. BDLSRII流式细胞仪

        三、操作步骤

        1. 收获脾脏,通过用显微玻片的磨砂面在5 mL 的DMEM中温和的破碎脾脏,以得到单细胞悬液。

        2. 将细胞转移到50 ml 锥形管,4℃300RCF降速离心5 min。

        3. 弃上清,保留沉淀。

        4. 用0.17 M 氯化铵重悬细胞,冰置5 min。

        5. 再加入15 mL DMEM,300RCF4℃离心5 min。

        6. 弃去上清液,加入20 mL 培养液DMEM重悬细胞,细胞计数。

        7. 在50 ul 的Fcblock(1:200 in FAC Sbuffer)重悬200万脾细胞,冰上孵育30 min。

        8. 用200 mL PBS清洗细胞,300RCF4℃离心5 min。

        9. 弃上清,用30 ul 抗鼠CXCR5-生物素(1:50 in FAC Sbuffer)重悬细胞,冰上孵育30 min。

        10. 用200 mL PBS清洗细胞,300RCF4℃离心5 min。

        11. 弃上清,用30 ul 抗鼠CXCR5-生物素(1:50 in FAC Sbuffer)重悬细胞,冰上孵育30 min。

        12. 用200mLPBS清洗细胞,300RCF4℃离心5min。

        13. 弃上清,用30ul抗体3-7混合物(1:50 in FAC Sbuffer)重悬细胞,冰上孵育30min。

        14. 用200 mL PBS清洗细胞,300RCF4℃离心5 min。

        15. 用400 uL DAPI(3 uM in PBS)重悬细胞,用BD LSR II流式细胞仪分析所得细胞。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序