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流式细胞分析
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中乔新舟
上海中乔新舟生物科技有限公司主要依托复旦大学、同济大学等上海地区多家著名高校,拥有一支富有经验的开发团队,专业从事细胞及细胞周边产品的研发、生产、销售及科研技术服务。我们以成为的生物医学产品供应商为目标,致力为细胞生物学、分子生物学、医学及药学等生命科学领域提供专业服务。
上海中乔新舟生物科技有限公司产品线比较丰富:现有美国Sciencell(原代细胞及配套全能培养基、细胞培养试剂、检测试剂盒、生长因子等)、新一代无血清培养基、年产1000万毫升内蒙古合作牛血清生产基地等。
特色产品:原代细胞、细胞株、ELISA试剂盒、澳洲美洲血清、国产血清、各种培养基。
仪器设备:激光片层扫描显微镜(活细胞高速荧光显微成像解决方案)、3D细胞大规模扩增系统 。
特色服务:转基因白鼠、动物模型、慢病毒介导的基因过表达和沉默。
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文献和实验#01 什么是同型对照? 同型对照(Isotype Control),是指与使用的流式抗体具有相同种属来源、亚型、荧光标记物、使用剂量和浓度,但对目标靶点无特异性结合的抗体。同型对照通常用来消除抗体与抗原的非特异性结合造成的背景染色。 #02 为什么要做同型对照? 流式抗体与靶标的结合,是通过抗体的 Fab 端与靶标 Marker 进行特异性结合而完成的。白细胞(除T细胞外)表面大多表达 CD16、CD32、CD64 等 Fc 受体,这些受体可与各种抗体的 Fc 端非特异性结合,出现非特异
大部分老师做流式实验时,会用到空白对照、单阳对照、同型对照、生物学对照等,用到 FMO 对照的比较少。尽管如此,FMO 对照在设置圈门时仍具有重要的参考价值。 一方面,FMO 对照有助于精确地设置阴阳性群体界限。我们在做多色实验时,可能会出现某些通道信号难以区分的情况,主要是因为其他某个荧光对该通道的干扰很大。FMO 对照(Fluorescence Minus One,荧光扣除一)减少了其中一个通道的荧光抗体,能够帮助衡量其它通道的荧光漏溢情况。 如下图所示,PerCP/Cyanine
的上样条件。细胞量为1×106 个/ml,1ml。 2) 上机前,应对样本进行混合,以使样本均一(注意使用排枪吹打,勿产生气泡)。 3) 以上protocol 仅针对于悬浮细胞。 4) 药物刺激浓度需先做梯度检测。 第七章 流式细胞分析分选术 42 2. Cell Cycle Assay 常用的实验细胞株包括:293(T),MCF7,U2OS,Saos,Hela 等 以U2OS 细胞为例 2.1 细胞培养及铺板 1) 细胞株及材料: a) 细胞
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