简介
原理
材料与仪器
器材：
① 载玻片
② 盖玻片
③ 计数板
④ 10 mL 吸管
⑤ 吸管橡皮球
⑥ 10 mL 离心管
⑦ 微量移液器吸头
⑧ 滴管
⑨ 滴管橡皮头
⑩ 盖玻片
⑪ Parafilm 膜
⑫ 湿盒
⑬ 微量移液器及其吸头
⑭ 普通显微镜
⑮ HeLa 细胞（或别的细胞）。
试剂：
① 中性树脂凋亡诱导剂（根据情况自定）
② 消化液（0.02％ EDTA）
③ PBS、4％ 多聚甲醛（0.1 mol/L PBS，pH7.4）
④ 3％ H2O2（避光保存）
⑤ 蛋白酶 K
⑥ 孵育液
（100 mmol/L 二甲胂酸钾（pH7.2），2 mmol/L CoCl2，0.2 mmol/L DTT，150 mmol/L NaC1，0.05% BSA）
⑦ 5 x TdT 反应缓冲液
（500 mmol/L 二甲胂酸钾（pH7.2），10 mmol/L CoCl2，1 mmol/L DTT。）
⑧ 末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）（4U/μL）
⑨ Dig-dUTP（40～80 μmol/L）
⑩ 双蒸水
⑪ 10 x DAB-H2O2 显色液
（0.1 mol/L Tris-Cl（pH7.6），0.4％ DAB，-20 ℃ 避光保存，用前稀释 10 倍并加入 H2O2。）
⑫ 苏木精染液
步骤
原位末端标记法检测细胞凋亡的基本过程可分为如下几步：
A 样品处理玻片预先用多聚赖氨酸或 APES 进行处理。制备细胞涂片（见基本方案 1）：4％ 多聚甲醛-0.1 mol/L PBS（pH7.4）室温固定 1 h。
B PBS 洗 3 x 5 min。
C 3％ H2O2 室温处理 10 min，封闭内源过氧化物酶活性。PBS 洗 2 x 3 min。
D 蛋白酶K 室温处理 10～60 s，PBS 洗 3 x 3 min。
E 加 30 μL 孵育液，Parafilm 膜覆盖，室温孵育 10 min。取下 Parafilm膜，用纸巾吸去水。
F 4 μL 5 x TdT 反应缓冲液＋1 μL TdT＋1 μL Dig-dUTP＋14 μL 双蒸水，混匀后滴加在标本上，Parafilm 膜覆盖，37 ℃ 孵育 1～2 h。取下Parafilm 膜，PBS 洗 3 x 2 min。
G 加 20～50 μL 5 U/mL 的辣根过氧化物酶偶联的地高辛抗体，Parafilm 膜覆盖，37 ℃ 孵育 30 min。取下 Parafilm 膜，PBS 洗 3 x 2 min。
H 0.04％ 的 DAB 显色 5～10 min，镜下控制时间。过量的水清洗。
I 苏木精（或甲基绿）轻度复染 30 s～3 min。过量的水清洗。
注意事项
2 废弃物和废液应单独存放。
来源：丁香实验
