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        正常大兔主动脉内皮细胞的培养

        互联网

        1946

        实验材料:

        1.  正常大兔主动脉;

        2.  不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2;

        3.  培养用液:M199培养液(含20%小牛血清);0.125%胰蛋白酶-0.01%EDTA(1:1,V:V)混合消化液;D-Hanks液、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素;

        4.  培养器具:培养瓶或皿、白内障、眼科剪、镊子等;

        培养方法:

        1.  将动物主动脉取出后,用丝线结扎血管一端,然后用探针顶住该端,将整条血管翻转,使内膜翻在外面。将另一端翻折入腔内0.5cm并用丝线扎紧,以防外膜外露及避免酶液进入外膜腔内;

        2.  用D-Hanks液清洗干净外翻的内膜面,将血管浸泡在含0.1%胶原酶溶液的小瓶内。盖上瓶盖,在37℃水浴中轻轻摇荡消化,使内皮细胞离散下来。消化15—20min后,见酶液稍有浑浊,即加入等量的含20%小牛血清的M199培养液,以终止酶的作用。离心(1500r/min,5min)后,弃上清液,用20%小牛血清M199培养液重新悬浮细胞;

        3.  接种到培养器皿内,入37℃、含5%CO2 培养箱中培养。待细胞长满瓶皿的生长表面即可传代; 

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