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        饱和硫酸铵盐析沉淀法纯化多克隆抗体

        互联网

        9344

        材料和试剂

        1. 饱和硫酸铵(saturated ammonium sulfate,SAS)。

        2. 透析袋。

        3. PBS。

        4. 高速低温离心机

        操作步骤

        1. 待提取样品经4℃或室温离心13 000r/min(20000×g),30min,收集上清;

        2. 取上清约20ml与等体积生理盐水混合后,于搅拌下缓慢滴加40ml SAS,于4℃沉淀30min以上或过夜,使蛋白充分沉淀。

        3. 13 000r/min,10min 4℃离心,弃上清。

        4. 用12ml生理盐水溶解沉淀,同步骤(2)滴加8ml SAS,4℃1h。

        5. 重复步骤(3)离心,用13.3ml生理盐水溶解沉淀,

        6. 滴加6.6ml SAS,4℃1h; 

        7. 重复步骤(4)离心后所得沉淀物用少许盐水溶解沉淀,并装入透析袋。

        8. 用大于20倍体积的PBS于4℃透析,更换透析液数次,可置-20℃保存或进一步纯化

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