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        饱和硫酸铵沉淀IgG

        相关实验:从抗血清、腹水或杂交瘤上清液中纯化免疫球蛋白 G 组分

        最新修订时间:

        原理

        虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选,然而有时这种纯化方式却非必需,或者无法实施进行(如有时抗原量不充足)。

        材料与仪器

        步骤

        1)于 4℃ 不断搅拌,往 2 体积的抗血清、腹水或组织培养上清中,逐滴加入 1 体积 SAS 溶液。加完后置于 4℃,不间断地搅拌 2〜4 h 以形成沉淀。


        2)4℃ 12 OOO g 离心 20 min, 用预冷的溶于 PBS 的 33% SAS 溶液在涡旋混合器上振荡洗涤沉淀,所用溶液的体积与原抗血清、腹水或组织培养上清等体积,重复洗涤。


        3)在涡旋混合器上温和振荡将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中(5%〜10% 的原始体积)。


        4)4℃透析 IgG 溶液 48 h 以上,期间换 3 次(每次换 4L) 所需缓冲液,以去除硫酸铵。

        来源:丁香实验

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