关于CHO-K1细胞稳定转染和瞬转COS的问题

问：

各位大虾小弟我最近一直在瞬转COS细胞分泌表达上清一直没有表达也浓缩过再做ELISA WB 都没有啊时间挺长了实在等不及了就想稳定转染cho-k1细胞系通过MSX来筛选加压25UM的MSX 结果还不到两个星期CHO全死了不知道怎么回事如果有表达的话应该是分泌表达的怎么我总是做不出来呢很是一个郁闷阿 质粒纯度和浓度都应该没问题希望做过这方面试验的高人指点一下到底哪里我还没有考虑到阿谢谢了

答：

提三点建议：

1，用MSX筛选之前最好做预实验，摸出其最小有效浓度，然后用这个浓度去筛选阳性克隆；

2，试试间断筛选，就是筛选一周到10天，换压力培养基为完全培养基，细胞状态好转后，再立刻换成压力培养基；

3，在检测蛋白水平之前，一定先在mRNA水平予以检测，如果检测出目的基因的转录，再行蛋白水平的检测；据我的经验，好像委托公司进行ELISA法检测更为价廉物美。