稳定转染（永久转染）细胞株构建

稳定转染细胞株的构建

1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用：     观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：

稳定转染细胞株的鉴定

问：目的蛋白7kd，筛了稳定株，可western检测不到，因为电泳时marker也跑得不好，因此不能确定是假阳性。载体上带了myc tag，不知做免疫荧光来检测是否可行？谢谢答：原理上可行。如果免疫荧光对你来说比wb更熟练的话，你可以选择用荧光来检测。反之，还是用wb检测，再把实验尽量做得好一些。用wb的话，可以用你target蛋白的特异性抗体，也可以用anti-myc的抗体，最好两者都做了，更能说明问题。不知道说的明白不？

你已经是个成熟的细胞了，该学会自己做实验了

物的培养物称为细胞株，也就是说，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。简而言之，细胞系概念强调细胞系是首次传代成功后的细胞群，细胞株概念强调细胞群的纯度，认为细胞株是克隆的结果。那再来说说，什么是稳定转染和瞬时转染。细胞：稳定转染，就是进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。瞬时转染表达时间短暂，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，不能随细胞分裂而一同复制，导致最后拷贝数被稀释