• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        细胞核的分离

        互联网

        12123
        细胞核作为一个功能单位,完整地保留细胞物质,并指导RNA合成,后者为蛋白质其它细胞组分合成所必需。因此,细胞的分离是研究基因表达及细胞核形态结构的首要步骤。不同组织来源的细胞经匀浆后,用分级离心或声波处理等方法进行分离纯化。
        操作方法:
        1.制备巨噬细胞:取体重约200g大鼠一只,腹腔注射0.2%配制的1%巯基乙酸钾5~6ml两次,5天后处死。冰浴中用生理盐水收集腹腔细胞,生理盐水洗涤细胞、1500r/min×5min离心收集细胞,沉淀80~90%为巨噬细胞。
        2.将细胞悬液在5倍体积的10mmol/L Tris -HCl pH7.4,10mmol/LNaCl,1.5mmol/L MgCl 2 中,加入10ul 10% SDS /ml,用玻璃匀浆器轻轻地匀浆。
        3.加入2ml 0.34mol/L蔗糖,10mmol/L MgCl 2 再匀浆1次,下面铺一层0.88mol/L蔗糖。800g ×5min 离心,收集沉淀的细胞核。
        4.在0.88mol/L蔗糖中再纯化一次,然后将细胞悬浮在10ml 0.34mol/L蔗糖,0.05mmol/L MgCl 2 。用声波处理5~6次,每次10s。
        5.加2倍体积0.88mol/L蔗糖,8oog×30min离心,沉淀部分为细胞核。
        6.将细胞核悬浮在2.4mol/L蔗糖中,50,000g×1h离心,沉淀为纯细胞核,将其保存在0.25mol/L蔗糖、0.55mmol/L MgCl 2 中备用。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序