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        细胞核的预先分离

        相关实验:从培养细胞或组织中制备细胞核基质/中间纤维骨架结构实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 在 4℃ 用 PBS 清洗细胞,用一医用台式离心机低速离心。然后用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液悬浮沉淀。每 107 个细胞用 1 ml 缓冲液。用 0.002 英寸间隙的 Dounce 匀浆器破碎细胞。

        含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液:

        10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)

        10 mmol/L NaCl

        1.5 mmol/L MgCl2

        每毫升溶液中含的 Tween-DOC 贮存液和 850 μl RSB。用前从 100X 的贮存液中加入 VRC 和 AEBF,至终浓度为 2 mmol/L 和 1 mmol/L。

        Tween 40 和 DOC 贮存液:

        6.67% (w/v) Tween 40

        3.33% (w/v) 脱氧胆酸钠

        可分成小份冻存于 -20℃

        2. 4℃,1000 g 离心 3 分钟沉淀细胞核。用含 Tween 40 和 DOC 的 RSB 缓冲液洗后再次沉淀细胞核。

        来源:丁香实验

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