• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        试剂的制备

        相关实验:透化细胞和退化细胞器中蛋白质的磷酸化实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        这些试剂在后面许多地方要用到,应在进行下述实验前配好。

        1. 胞外缓冲液(pH 7.2,37℃)

        110 mmol/L NaCl

        10 mmol/L KCI

        1 mmol/L MgCl2

        1.5 mmol/L CaCl2

        30 mmol/L HEPES

        10 mmol/L 葡萄糖

        过滤灭菌,4℃ 保存可达 1 个月。

        2. 胞内缓冲液(pH7.4,37℃)

        25 mmol/L NaHCO3

        120 mmol/L KCl

        1 mmol/L KH2PO4

        10 mmol/L MgCl2

        20 mmol/L HEPES

        10 mmol/L 葡萄糖

        过滤灭菌,4℃ 保存可达 1 个月。

        3. 透化缓冲液(pH7.4,37℃ )

        120 mmoI/L KCl

        25 mmol/L NaHCO3

        5 mmol/L HEPES

        10 mmol/L MgCl2

        1 mmol/L KH2PO4

        1 mmol/L EDTA

        30 μmol/L CaCl2

        该缓冲液含有 100 nmol/L 游离钙离了。过滤灭菌,4℃ 保存几个月。

        4. 标准裂解缓冲液(pH 7.4,37℃)

        50 mmol/L HEPES

        100 mmol/L NaCl

        2 mmoI/L EDTA

        2 mmol/L EGTA

        50 mmol/L NaF

        10 mmol/L β-磷酸甘油

        1 mmol/L Na3VO4

        1% NP-40 或 Triton X-100

        4℃ 保存可达 6 个月。

        5. 2X 裂解缓冲液(pH 7.4,4℃)

        100 mmol/L HEPES

        200 mmol/L NaCl

        40 mmol/L EDTA

        4 mmol/L EGTA

        100 mmol/L NaF

        20 mmol/L β-磷酸甘油

        2 mmol/L Na3VO4

        2% NP-40 或 Triton X-100

        为了螯合激酶反应中过剩的镁,该缓冲液含 10X EDTA。4℃ 保存可达 6 个月。

        6. 2X SDS-PAGE 加样缓冲液

        0.125 mol/L Tris-HCl ( pH 6.8) 室温   4ml

        10% SDS (w/v)                                4ml

        甘油                                               1ml

        β-巯基乙醇                                      0.4ml

        水                                                  0.6ml

        溴酚蓝                                           20mg

        7. 双向-PAGE 裂解緩冲液

        20 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.0)

        0.3% SDS (w/v)

        1% β-巯基乙醇(v/v)

        8. 双向-PAGE 加样缓冲液

        尿素                                                   6g

        NP-40                                                4ml

        40% 在所需 pH 范围内的两性电解质     0.5ml

        DIT                                                     0.154g

        水                                                      1.12ml

        分成小等份 -70℃ 保存可达 1 个月。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序