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        【求助】有哪位用RT-PCR做IkappaB的吗?

        丁香园论坛

        1853
        小弟一直在做NFkappaB与IkappaB,有几个问题一直搞不明白,查了一些文献也没查到什么内容
        1 IkappaB磷酸化及泛素化之后,也就是降解了,NFkappaB就可以入核,也就是说IkappaB的量下降了,我用RT-PCR法可以检测到IkappaB相关的表达吗?可果用RT-PCR方法得出IkappaB的表达随时间增强,是不是意味着有更多的IkappB与NFkappaB结合?我用RT-PCR方法检测到的IkappaB是结合NFkappaB的IkappaB,还是游离的于胞浆中的,与NFkappaB分离的IkappaB呢?
        2 关于有人提到呈查到过文献说“据查当IKBα被磷酸化后分解后,P65和P50才能解离激活。所以,当刺激开始的时候,磷酸化的IKBα下调。由于P65活化后又可以上调IKBα表达,所以,经过一定时间之后,IKBα恢复。从开始下降-最低点-开始增多-恢复,这是一个变化过程。”这这方面的文献提供一下给小弟吗?相关连接也可以!主要是NFkappaB与IkappaB之间的量的关系。谢谢!
        我觉得还是用western来做比较好,直接看蛋白表达更确切。RT做出来的只是mRNA水平的表达,谁知道后来这些RNA是否都成了蛋白?可以做IP来检测蛋白之间的结合。
        楼上所言极是

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】有哪位用RT-PCR做IkappaB的吗?

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