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        处女座实验狗都无法抵抗的慢病毒滴度标定方法

        吉凯基因

        846

        绝对定量时代——引领慢病毒行业新标准 

        高大上的慢病毒是怎样炼成的(一)

         

        慢病毒活性滴度用什么单位?

        看 TU!看 TU!看 TU!

        TU = transducing units,即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的 VG/mL,VP/mL 都是所有病毒颗粒数,死的活的都算上,一片虚假繁荣,请自由玩儿去!

         

        慢病毒活性滴度怎么标定最准?

        绝对定量!绝对定量!绝对定量!

        又绝对又定量的方法,准到不要不要的!再说了,这「绝对定量」是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法,诺华、Juno,这些 CarT 大佬们都用!不准?不准的话 FDA 能认吗?

        复杂又昂贵的方法,为了准,咱们忍啦!

        1. 标准品检定绘制标准曲线,精确定量病毒基因组 DNA 拷贝数。
        2. 测定插入细胞基因组的 5'LTR—3'LTR 病毒基因组拷贝数。
        3. 工具细胞 293T 基因组中的病毒特征单拷贝基因 A 和宿主特征单拷贝基因 B。
        4. TU=N  C / V =(初始细胞 / 感染病毒体积) × (2 × A 基因拷贝 / B 基因拷贝),计算感染效率。
        5. 不要反转录,不要受 RNA 降解或反转录效率影响。
        6. 如果病毒有荧光或者抗性,再结合表型联合判断。

         

        慢病毒滴度标那么准,有用吗?

        为啥细胞用慢病毒一感就死?

        为啥细胞用慢病毒感染后会出现小黑点?

        很可能是,过感染啦!过感染啦!过感染啦!

         

        有没有先做预实验确定细胞的 MOI?有没有根据病毒滴度准确计算病毒用量?

        越是高浓度高纯度的病毒,越是需要精确计算滴度,以避免感染不足或者过量感染,保证最好的细胞状态,以继续下游实验,这样才能省时省力省病毒。

        最后,附赠感染预实验步骤详解,请叫我雷锋!

        处女座实验狗都无法抵抗的慢病毒滴度标定方法

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