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        小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项

        Elabscience

        3896

        小鼠骨髓单细胞悬液制备流程

        1. 颈椎脱臼法处死小鼠,放在75%酒精中浸泡5 min。提前于超净台上准备一个消毒托盘(可用无菌口罩或者用浸满酒精的纱布代替),取出小鼠并铺于消毒托盘上。
        2. 在无菌环境下取小鼠的后肢骨。用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开,并分离两下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪断,游离出小鼠的两条后肢。
        3. 小心剥离肌肉(肌肉两端的白色坚韧组织为肌腱,可以顺着肌腱分离,肌肉主要靠肌腱与关节相连),分别剪下Femurs(股骨)和Tibias(胫骨),剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意在该过程中应保留尽可能多的骨髓腔。
        4. 拿一支1 mL的无菌注射器,吸取1 mL PBS,轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓。重复2~3次,可冲出绝大部分细胞。冲洗完后,用移液器轻轻吹打细胞,将细胞团吹散。
        5. 将冲洗液用200目的滤网过滤,滤液收集于15 mL离心管中,300 g离心5 min,弃上清。
        6. 用细胞染色缓冲液重悬细胞,细胞计数,并调整细胞浓度至1×107/mL。

        小鼠骨髓单细胞悬液制备流程及注意事项

        注意事项:

        骨髓样本细胞分群明显,可以裂解红细胞,也可不裂解。如需裂解红细胞,可以加入1~2 mL(视细胞沉淀的量而定)1×红细胞裂解液,轻轻吹散细胞,室温静置 2 min。再加 10 mL PBS终止裂解,300 g离心5 min。

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