卵巢组织如何制备单细胞悬液呢？

制备关键是先取到新鲜的组织样品，清洗后先用剪刀剪碎（如图中的组织样品），对于后续加入胶原酶进行裂解非常关键，接着就是常规的细胞悬液步骤。

1. 用PBS清洗组织后放置在培养皿中，用手术刀将组织粗略的切碎。

2. 这一步对于提高消化效率至关重要！

3. 切碎的组织转移到含有胶原酶解离液的50 mL离心管中（10 mL/组织，但这取决于组织的大小）。

4. 拧紧盖子，用封口膜密封。

5. 37 °C 孵育45分钟。每10分钟摇晃一次。

6. 用100 μm细胞过滤器过滤。450g离心5分钟。

7. 小心去除上清液，留下的液体在0.5 mL和1mL之间。

8. 细胞沉淀用5 mL PBS重悬。

9. 用台盼蓝染色后进行细胞计数器检查细胞活力，满足需求则继续下一步。

10. 450g离心5分钟，弃上清。5 mLPBS重悬。

11. 重复步骤9，使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞数量和活性。

12. 检测细胞活性，活性在85%以上可用于后续测序实验。

使用胰蛋白酶消化，和Dnase消化