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        X-gal和IPTG,什么时候加到培养基里好?

        互联网

        10917

        各位仁兄
                我最近做克隆遇见一个问题,做LB固体培养基的时候,X-gal和IPTG是直接加到培养基面好?还是现用的时候,再涂好?要是加到里面,加多少量较好呢?谢谢

        问题补充: (补充时间:2009-11-13 21:29 )
        下面的回答中,X-gal的量是我用的量的一半。 若加少了,有什么缺点呢?到底标准是多少呢?谢谢

         

        答案1: 说到底,X-gal只是半乳糖苷酶的作用底物,底物的量没有一个确定的值,只要底物的浓度足够显色就可以了,一般在培养基里,X-gal的终浓度是40ug/ml,IPTG的终浓度是24ug/ml,就可以显色,我们把这些直接涂在表面上,就更容易显色了,再多就有点浪费了

        答案2:如果你的用量很多,很且急着用的话,做好直接加到培养基中。但若你只需一两个板的话,现用时再加,而且x-gal很贵,我一般是现涂的,每个板x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)。

        答案3:一般是配好的amp+ LB板,涂板的时候把x-gal 40ul(20mg/ml),IPTG 4ul(200mg/ml)加入到菌液里,然后混匀涂板。也可以先涂到板上在涂菌。
        两者我做的试验都行的。配培养基的时候,一般不直接加x-gal,IPTG,确实存在浪费问题,因为菌只在平板表面长。

        答案4:在1小时摇菌以后加在菌液里混匀。X-GAL怕光,注意避免大量光照。在超净台操作时可以将照明灯关掉。我做的蓝白斑筛选菌长得太密了,一般不全涂。取十分之一,和40XGAL和4IPTG混合就行了。如果涂少了的话,蓝斑会不明显。发现蓝斑不明显可以把板放4度半个小时以后颜色会更深一些
         

        答案5:在含有适当抗菌素的预制90mm琼脂板中央滴加40ul2%x-gal(20mg/ml), 7ul20%IPTG(0.8mol/L)上现涂的,涂的时候动作要快,而且要均匀。

        (责任编辑:大汉昆仑王)
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