• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        用X-gal和IPTG筛选细菌菌落(α互补)

        相关实验:用 X-gal 和 IPTG 筛选细菌菌落(α 互补)

        最新修订时间:

        原理

        显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液和溶剂

        IPTG 溶液(20%,m/V)

        X-gal 溶液(2%,m/V )

        用X-gal和IPTG筛选细菌菌落(α互补)

        2. 培养基

        含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板

        LB 或 YT 顶层琼脂

        3. 专用设备

        可调至 45℃ 的恒温块

        木制牙签或接种环

        4. 载体和菌种

        重组质粒转化的 E.coli。

        二、方法

        1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管,将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。

        90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂;150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。

        2. 从加热块取出第一支试管,快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板)或 10000 ( 150 mm 培养板)的细菌悬液 0.1 ml。盖紧试管盖颠倒数次,以使细菌在琼脂中混匀。

        3. 打开试管盖,按表所示加入适量 X-gal 和 IPTG ( 如果需要)。盖紧管盖缓慢颠倒数次混匀内容物。

        用X-gal和IPTG筛选细菌菌落(α互补)

        4. 快速将溶化顶层琼脂倾入含有适当抗菌素的凝固琼脂板的中部,旋转培养板使琼脂散匀。

        5. 重复步骤 2~3,完成所有样品的铺板。

        6. 于室温使琼脂凝固,擦净培养板盖上的冷凝水,颠倒培养板于 37℃ 培养12~16 h。

        7. 取出培养板于 4℃ 放置数小时使菌落显色。

        8. 鉴定携带重组质粒的克隆。

        携带野生型质粒的克隆含有 β-半乳糖苷酶活性,菌落的中央呈淡蓝色,外周呈深蓝色。

        携带重组质粒的克隆无 β-半乳糖苷酶活性,菌落呈奶白色或蛋壳蓝,有时会在菌落中央出现假性蓝斑。

        以鲜黄色为背景观察琼腊板可增强眼的辨别蓝色和白色菌落的能力。

        9. 筛选和培养携带重组质粒的克隆。

        软琼脂中蓝色或白色克隆可在不同方向上形成,时常看起来像是遥远而倾斜的星空,不管其方向性,这些克隆很容易用接种环或牙签通过穿剌琼脂浅层而被挑选出来,并转移至含有适当抗菌素的培养基中。

        用X-gal和IPTG筛选细菌菌落(α互补)

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序