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        IPTG法

        相关实验:融合蛋白的免疫筛选实验

        最新修订时间:

        原理

        用抗体筛选λgt11 cDNA文库时,可待噬斑长到一定裎度方可诱导表达融合蛋白,筛选到阳性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌体生长3~4 h 后,将含诱导剂IPTG的滤膜放入噬斑平板,即可诱导β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表达,继续在37℃培养,然后按基本方案用抗体对影印滤膜进行筛选。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  用1×104~5×104融合有cDNA的λ噬菌体感染0.5~1.0 ml 过夜培养的Y1090新鲜菌悬液。

        2.  加入预热到47℃的7 ml 顶层琼脂中,铺150 mm LB平板,42℃培养3.5 h。
         
        3.  将132 mm 直径的硝酸纤维素滤膜故入10 mmol/l IPTG溶液中浸泡后,取出干燥。

        4.  再将含IPTG的滤膜放入噬菌体文库平板中,37℃培养3.5 h。

        5.  每张滤膜作好标记后取出,封闭滤膜上的剩余的蛋白结合位点并进行杂交检测。

        来源:丁香实验

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