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        酶的性质实验—pH对酶活力的影响

        互联网

        10749

        【实验原理】
        酶活力受环境pH的影响,在一定pH下,酶表现最大活力,高于或低于此pH,酶活力降低,通常把表现出酶最大活力的pH称为该酶的最适pH。pH影响酶活力的主要原因有以下几个方面,首先,pH影响酶分子活性部位上有关基团的解离,另外,也影响底物的解离状态,从而影响酶活性中心与底物的结合或催化。其次,有关基团解离状态的改变影响酶的空间构象,甚至会使酶变性。尽管有一些酶能忍受较大的pH的变化,但大多数酶保持活性的pH值范围很窄。正因如此,生物体使用缓冲液调节体内的适宜pH值。

        【实验材料】
        1. 实验器材
        试管及试管架;漏斗及滤纸;恒温水浴锅;温度计;移液管
        2. 实验 试剂
        ⑴ 1% 酪蛋白溶液:同酶的特异性实验
        ⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液:同酶的特异性实验
        ⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶的特异性实验
        ⑷ 0.1mol/L盐酸
        ⑸ 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液
        ⑹ 0.4 mol/L碳酸钠溶液
        ⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
        ⑻ 福林 试剂 : 同的酶特异性实验

        【实验操作】
          取三支 试管 , 按下表加入试剂:

         

        试剂

        试管 编号

        1

        2

        3

        1% 酪蛋白溶液(ml)

        1.0

        1.0

        1.0

        pH10 缓冲液(ml)

        1.0

        0.1M HCl(ml)

        1.0

        0.2M NaOH 溶液(ml)

        1.0

        1/2000碱性蛋白酶溶液(ml)

        1.0

        1.0

        1.0

        实验现象

         

         

         

         

         

         

        混合均匀后,于40℃ 水浴 中保温15分钟。 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml,分别过滤,各吸取滤液1.0ml,加0.4M碳酸钠溶液5.0ml,福林试剂1.0ml,摇匀,于40℃ 水浴 保温15分钟,观察现象,比较在不同pH下,碱性 蛋白酶 活力的大小。
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