酶的性质实验—激动剂和抑制剂对酶活力的影响

【实验原理】

【实验材料】

　　1. 实验器材

试管及试管架；漏斗及滤纸；恒温水浴锅；温度计；移液管；721分光光度计

　　2. 实验 试剂

　　⑴ 1% 酪蛋白溶液：同酶特异性实验

　　⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液：同酶特异性实验

　　⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶特异性实验

　　⑷ 8×10 -3 M MnCl 2 溶液

　　⑸8×10 -3 M HgCl 2 溶液

　　(6) 0.4 mol/L碳酸钠溶液

　　⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液

【实验操作】

　　取三支 试管 , 按下表加入试剂：

试剂	试管 编号
1	2	3
1% 酪蛋白溶液(ml)	1.0	1.0	1.0
pH10 缓冲液(ml)	1.0	1.0	1.0
8×10 -3 M MnCl 2 溶液(ml)	1.0	―	―
8×10 -3 M HgCl 2 溶液(ml)	―	1.0	―
蒸馏水(ml)	―	―	1.0
1/2000碱性蛋白酶溶液(ml)	1.0	1.0	1.0
实验结果

混合均匀后，于40℃ 水浴 中保温15分钟. 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml，分别过滤，各吸取滤液1.0ml，加0.4M碳酸钠溶液5.0ml，福林试剂1.0ml，摇匀，于40℃ 水浴 保温15分钟。显色后用721型分光光度计，在波长680nm处测定光密度（比色时，以 蒸馏 水作空白）并记录。

【注意事项】

　　1．每个人的唾液淀粉酶活性并不相同，有时差别很大，因此稀释倍数可因个人情况而定。

　　2．少量的激动激或抑制剂就能影响酶的活性。但激动剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激动剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。对一种酶是激动剂，对另一种酶是抑制剂。

【思考题】

　　1．什么是酶的最适温度、最适pH值？有何实际意义？

　　2．影响酶的催化活性的因素有哪些？简要说明作用原理。

3．酶学实验必须注意控制哪些条件？为什么？