尘螨变应原的制备
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1932
尘螨变应原的制备
1)变应原
溶液制备的基本步骤：材料的粉碎和净化；去除材料中的脂肪和有害物质；有效成分的提取与溶液中分离与去除杂质；溶液的透析与浓缩；溶液的酸碱度的校正；溶液的灭菌及检测；溶液的急性毒性试验；溶液的标准化方法以及温度的控制和有效期的制定。
以上的步骤一般可适用于所有的变应原溶液的制备，但针对不同的材料还须做一些调整，如不含脂肪的材料则不需去脂，某些制剂需要透析和浓缩等。
2)尘螨的收集与培养：在我国，粉尘螨繁殖的高峰期为5～6月和9～10月，在此期间可以从面粉厂、粮店、食品厂以及磨坊等处的地面或米袋采集下脚粉尘。收集的粉尘先经2号筛去除大的杂质，再以4号筛除去较细的颗粒，最后倒人平皿，解剖镜下观测并用接种针或毛笔将螨接种于新鲜的面粉和大米上，在保持一定的湿度下常温培养。几周后观测螨的培养效果，并连同饲料再移人新的培养基中继续培养，反复数次可得大量的纯螨。
3)我国最常见的致敏螨种的形态特征
(1)户尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)：雄虫大小(240～280)um×(155―220)um，后盾板长大于宽。足I与Ⅱ等粗，基节内不突出，无胸骨。雌虫大小为(290～380)um×(220～260)um，形体较扁，后背中央皮纹纵行，足Ⅳ短小，足Ⅲ粗长。
雌、雄性户尘螨
(2)粉尘螨(Dermatophagoides／oinae)：雄虫大小(285～860)／1m×(200～245)um，后盾板宽短，足I特别粗短，基节I内突相接，有胸骨。雌虫大小(370～440)um×(235―220)um，体形饱满，后背中央皮纹横形，末端拱形，足Ⅳ等粗、细长。
雌、雄性粉尘螨
4)材料的去脂肪和有害物质
(1)去脂肪常用的有机溶剂：乙醚、丙酮、甲苯、二甲苯、苯、无水乙醇等。乙醚的优点是去脂效果好、挥发快，常被首选。其余溶剂安全系数较前者高，但缺点是挥发慢、去脂周期长。
(2)去脂方法：将粉尘螨体浸于有机溶剂中，室温下搅拌，待有机溶剂挥发后，重复2次。
5)有效成分的提取：将去脂的粉尘螨按重量比容积1；50(W／V)加入灭菌生理盐水于4℃下过滤灭菌，提取72h，每天振荡或搅拌4h。双层滤纸滤去虫体及杂质，溶液再经蔡氏过滤器(Seitzfilter)无菌过滤，校正pH值为7．0，4℃下保存备用。
6)尘螨性变应原溶液的标准化：螨的重量与提取液之比为l：50。
(1)总氮单位：变应原溶液含氮量与效价是成正比的，一般用凯氏定氮法检测最为标准。目前螨性疫苗注射液有两种规格，即12ug／ml(1：5 000)和6ug／ml(1：10 000)。
(2)蛋白氮单位：由于变应原中的有效成分主要是蛋白质，故测定其含量是表达其效价的方法之一。目前常用的方法是先把溶液的非蛋白氮除去(如磷钨酸沉淀)，然后用微量凯氏定氮法测定其蛋白氮含量。尘螨溶液的标准不得低于20 000蛋白氮单位／毫升(PNU／m1)。
