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        精核的制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 培养并收获 3L 1×106 细胞/ml 的哺乳动物组织培养的细胞(如 HeLa), 用 1L PBS清洗两次。


        2. 用 20 倍于沉淀体积(40 ml) 的裂解缓冲液重悬细胞沉淀,转移到杜恩斯匀浆器中,用 B 型研磨棒研磨 15 次以裂解细胞。在显微镜下观察裂解液。


        3. 4℃,3000 g 离心 15 min。


        4. 使用裂解缓冲液重复重悬及离心两次,再用缓冲液 B 重复一次。在最后一次离心之前,将重悬液用 2 mol/L NaCl 稀释 10~30 倍,测量 A260 值,估计核 DNA 的总量。


        5. 用 2 倍于沉淀体积的缓冲液 B 重悬得到的核,测量重悬液的总体积。


        6. 轻轻搅动,一滴一滴地加入 1 体积的缓冲液 B/0.6 mol/L KCl/10% ( V / V ) 甘油。

        4℃ 连续轻轻搅动 10 min。如有需要轻轻匀浆。


        7. 4℃, 17 500 g 离心回收精核 30 min。精核在液氮或干冰中速冻,并且可在 -80℃ 储存一年以上。

        来源:丁香实验

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