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        【求助】腺病毒构建相关问题

        丁香园论坛

        1864
        各位战友,大家好,我想请教个问题,在构建重组腺病毒载体时是不是必须先构进T载体中呢?谢谢!
        不是一定非要克隆到T载体,你也可以选择直接进行PCR产物酶切(注意引物设计两端的酶切位点选择和保护碱基),然后连接到你需要的目的骨架上。个人认为,我们用T载体主要是因为它作为中间克隆载体,相对比较容易操作,尽管想起来会觉得多了中间步骤,但是每一步都容易验证(比如克隆的片段需要测序是否正确,酶切验证等等),因此到最后的质粒构建过程都会比较可靠。

        对于我个人而言,我不喜欢直接酶切PCR,因为不知道为什么,我自己这样做的克隆效率,较之我老老实实克隆进入T-载体,成功效率要低一些。当然也许是因为我习惯使然,也许是因为我手笨好,不见得别人就做不好。习惯而已
        非常感谢!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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