miRNA过表达腺病毒构建与包装

腺病毒（Adenovirus，AdV）是一种非整合型双链DNA病毒，在自然界中广泛分布。虽然一些类型的腺病毒会引起人胃肠道、上呼吸道或眼部上皮细胞的急性感染；但是应用于基因治疗研究的腺病毒是安全的，对人无致病、致畸、致癌的潜在危害。无包膜的腺病毒颗粒直径为70～90 nm，呈二十面体对称，由252个直径为8～10 nm的壳粒排列构成。每个颗粒包含一个36000 bp的线状双链DNA分子，两端各
有长约100～600 bp的反向末端重复序列。根据Journal of Gene Medicine的统计，截至2006年，在全球1192项基因治疗临床试验方案中，有305项(26％)使用腺病毒载体，首次超过反转录病毒，居第一位。由于腺病毒可以感染呼吸道和消化道，所以它所介导的基因治疗可以静脉注射，还可以通过口服经肠道吸收，或通过喷雾、滴注经呼吸道吸收，使得基因治疗方案易于推广应用。腺病毒易于制备、纯化和浓缩
，且病毒滴度可高达1012PFU/ml，比反转录病毒高出10 0000倍以上。所以，它介导的基因治疗常采用in vivo的方式进行，是目前基因治疗临床试验中应用最多的一种载体。

腺病毒载体有下列优点：
（1） 研究背景比较清楚；
（2） 与人类基因组同源；
（3） 能够同时表达多个基因；
（4） 无需辅助病毒，可容纳几kb到几十kb的外源DNA；
（5） 宿主范围广，转染率较高，在增殖和非增殖期细胞中均能感染并表达基因；
（6） 不整合到靶细胞基因组中，无插入致突变性，无致癌性，对人无致病、致畸、致癌的潜在危害；
（7） 易于扩增和纯化，可获得滴度高（达到1012pfu/ml）、稳定性好、基因转移效率高的病毒；
（8） 可在肠道、呼吸道中繁殖，具有口服活疫苗的发展前景；
（9） 很容易进行临床应用规模的商业化生产，其病毒储藏及运送条件均十分清楚。
腺病毒载体的缺点主要是运输的基因不能持续表达，通常只表达5-20天，以及易引起局部组织炎症反应和机体免疫反应。针对这一缺憾，上海生博在Adeasy、AdMax等腺病毒系统的基础上，经过不断的改进与优化，建立了一套成熟的腺病毒包装系统，已解决各类科研用户的不同需求。该系统是以复制缺陷型腺病毒DNA为骨架构建成的重组腺病毒系统，在穿梭载体、病毒骨架载体及包装细胞系等方面有很大优势：出毒快捷、滴度高、包装可靠！世翱（上海）公司可以根据客户的需要，在重组腺病毒载体中加入各种报告基因（GFP、RFP等）或标签（ FLAG、HA、His等），纯化后的
病毒滴度可以达到 1×1010 - 1×1012 pfu/ml，可以满足细胞水平研究所需病毒量和满足瘤内注射需要量不同规格病毒。

上海生博提供的服务包括：过表达腺病毒构建与包装，RNA干扰腺病毒构建与包装，miRNA过表达腺病毒构建与包装，miRNA封闭腺病毒构建与包装。

生博AdMax腺病毒包装系统是Frank L.Graham教授建立的，由加拿大microbix公司经销。将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染HEK293细胞，利用Cre/loxP（或FLP/frt）重组酶系统的作用实现重组，产生重组腺病毒。